供货周期: | 现货 |
品牌: | 百欧博伟生物 |
规格: | |
货号: | bio-73372 |
CAS号: |
RT4 (人膀胱移行细胞乳头瘤细胞) 的说明及培养!
一、背景
膀胱癌是泌尿科常见的恶性肿瘤之一,居中国男性泌尿生殖系恶性肿瘤发病率第1位,其病死率位居恶性肿瘤的第8位,且呈上升趋势。膀胱癌易复发、侵袭及转移,新诊断的膀胱癌患者中约5%的患者已发生远处转移。关于其侵袭和转移机制目前尚未明确。近年来,虽然在膀胱癌的临床诊断和治疗方面有所进展,但由于缺少理想的诊断和预后标志物,其预后仍不理想。为了研究膀胱癌的发生、侵袭、转移机制,一般选用人膀胱癌RT4细胞进行系列的科学研究。
二、RT4细胞的简介
RT4细胞的组织来源是患有移行细胞乳头瘤的人膀胱器官。呈上皮细胞样,支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性,一般采用T25 瓶或者1mL冻存管包装。
三、培养步骤
1、细胞传代:
1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2 培养瓶中的培养液,用PBS 清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml 至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入5ml 完全培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml 离心管中,1000rpm 离心5min;
3)弃上清,沉淀细胞用1-2ml 完全培养基重悬,然后按1:2 比例进行分瓶传代,最后放入37℃,5%CO2 细胞培养箱中培养;
2、细胞冻存:
1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2 培养瓶中的培养液,用PBS 清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml 至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml 离心管中,1000rpm 离心5min;
3)用适量的冻存液(FBS:DMSO=9 :1)重悬细胞,并放置于冻存管中;
4)先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h,然后将其移入-80℃过夜,24h 后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。
3、细胞复苏:
1)从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具),快速将其置入37℃水浴中解冻,直至冻存管中无结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;
2)将冻存管中的细胞移至含6ml完全培养基的15ml离心管中,1000rpm 离心5min;
3)弃上清,沉淀用6ml 完全培养基重悬,接种25cm2 培养瓶,于37℃,5%CO2 细胞培养箱中培养。
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