近期,有不少使用PCR技术的用户向我们咨询CMA、CNAS扩项对实验室的要求,以及分子实验室常见的污染源及控制措施。接下来我们将汇总的问题一一跟大家解答分享。
1、分子实验室布局可参考的标准有哪些?
分子检测实验室建设可参考的有以下文件:
(1)卫办医政发〔2010〕194号1附件:医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则。
(2)GB/T27403-2008 《实验室质量控制规范 食品分子生物学检测》。
(3)GB 19489-2008《实验室生物安全通用要求》。
(4)WS233-2017 《病原微生物实验室生物安全通用准则》。
(5)CNAS-GL42:2016《基因扩增领域检测实验室认可指南》。
2、分子实验室的几个区可以合并吗?
根据卫办医政发〔2010〕194号 -临床基因扩增检验实验室区域设计原则。原则上临床基因扩增检验实验室应当设置以下区域:试剂储存和准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区。 这4个区域在物理空间上必须是完全相互独立的。《临床基因扩增检验实验室区域设计原则》中提到,可根据使用仪器的功能,区域可适当合并。
例如当使用实时荧光PCR仪进行检测时,扩增区、扩增产物分析区可合并为一个区;采用样本处理、核酸提取及扩增检测为一体的自动化分析仪,则标本制备区、扩增区、扩增产物分析区可合并。
3、PCR操作中常见的污染有哪些?
污染原因/特点及防控措施
PCR操作中常见的污染有PCR产物污染、样品污染、耗材污染、气溶胶污染等,具体介绍如下:
(1)PCR产物造成污染,拷贝量大、数量多,发生在仪器处,容易出现假阳性。需要尽量避免在PCR反应室开启产物盖子、PCR产物反应后立即处理、定期擦洗仪器。
(2)样品污染,由于样品本身存放、制样容器、提取过程交叉污染造成。建议制样过程把控、制样容器用3%过氧化氢浸泡、超声清洗。
(3)移液器污染,引发原因有:反复用力吸打、没有定期擦洗检修移液器、连续操作大量样本、吹吸高浓度阳性对照。建议制样过程把控、制样容器3%过氧化氢浸泡、超声清洗、操作连续大量样本时用过滤吸头。
(4)气溶胶污染,由于剧烈震动反应管、突然开盖、反复吹吸引起,大力吸样一个气溶胶颗粒可携带48000个拷贝。建议震荡后短暂离心再开盖、避免反复吹吸、连续大量样本时用过滤吸头。
4、PCR操作全过程的污染防控原则和措施介绍
(1)合理的实验室分区,试剂贮存和准备区,样品制备及体系配制区,扩增区,扩增产物分析区。
(2)PCR试剂应在装有紫外灯的超净工作台或负压工作台中配制和分装存储,分装应标明时间、种类和编号。
(3)实验后清洁,实验台表面、离心机、移液枪用10%次氯酸钠消毒,桌椅用75%乙醇擦拭,定期打开紫外灯对空气进行消毒。
大家如果还有关于微生物检验相关的问题可以留言给我们,我们会请教专家或我们研发老师,之后分享答案哈。
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