细菌回复突变试验(Bacterial Reverse Mutation Test),又称Ames试验,是以营养缺陷型的突变体菌株为指示生物检测基因突变的体外试验,可检测一个或数个碱基对的置换、增加或缺失造成的点突变,在食品、药品、化学品、化妆品、农药、医疗器械等多个领域中得到了广泛的应用。
1 Ames试验菌株及菌株鉴定
常用的Ames菌株有组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella Typhimurium)或色氨酸缺陷型大肠杆菌(Escherichia coli)。为保证检测结果的可靠性,Ames试验需使用菌株组合进行试验。推荐的菌株组合方案如下:
鼠伤寒沙门氏菌TA1535
鼠伤寒沙门氏菌TA97a或TA97或TA1537
鼠伤寒沙门氏菌TA98
鼠伤寒沙门氏菌TA100
鼠伤寒沙门氏菌TA102或大肠杆菌WP2uvrA或大肠杆菌WP2uvrA(PKM101)
表1 常用Ames试验菌株突变基因和检测类型
然而,因突变型菌株的某些特性易丢失或变异,故需根据实际需求对菌株的基因型进行鉴定,保证菌株特性符合Ames试验的要求。尤其是在遇到以下情况时,更应该对菌株特性进行确认:
(1)投入使用前;
(2)在收到培养菌株后;
(3)当自发回变数不在正常范围内时;
(4)当对标准诱变剂丧失敏感性时;
(5)当需重新进行菌株保藏时;
(6)当使用主平板进行传代时。
表2 试验菌株生物学特性鉴定标准
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