方案摘要
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CCK-8全称Cell Counting Kit-8试剂,可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。
关于PIPETTY电动移液器在CCK-8实验中的应用
方案摘要:CCK-8全称Cell Counting Kit-8试剂,可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。
方案详情:CCK-8全称Cell Counting Kit-8试剂,可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。为了减少CCK-8实验复孔之间的差异,铺板时要注意铺均匀。
1、 实验准备
1、 PIPETTY MSIC01-02-1000电动移液器一把
2、 配套吸头FDT-1000A-1-TLSF
3、 试剂:CCK8检测试剂盒、DMEM或其他培养基、双抗、FBS、PBS、DMSO
4、 细胞计数板
5、 5ML离心管
6、 96孔板
7、 记号笔1只
2、 实验原理
CCK8全称Cell Counting Kit-8试剂,可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为:该试剂中含有水溶性的四唑盐WST-8[化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐],它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan dye)。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。
CKK-8检测原理
3、 操作步骤
1、 先在盖子上标记好信息
2、 孔板最外圈加PBS
3、 先用细胞计数器计数细胞悬液中的细胞数量,最好不要超过10^8/ML,然后将PIPETTY移液枪调到混匀模式,吹匀细胞悬液(如果用普通移液枪的话,细胞一定要吹打均匀,呈单细胞!)
4、 将移液枪调到100μL的分液模式开始铺细胞,为了避免细胞分布不均匀,先用移液枪将吹打均匀的细胞吸起来,让后将枪头紧贴着孔的一侧壁(注意枪头的尖不要接触孔底),然后将枪头中的细胞缓缓的打下去,种好之后千万不要摇晃板子。
5、 第一个细胞铺完啦,现在重复以上步骤开始铺第二个细胞,(这里有个小TIPS,如果用普通移液枪需要铺10个孔混匀一次细胞液,避免细胞沉降带来误差,但是PIPETTY移液枪非常便捷,一步到位,吹打一次就OK啦)
补充:从6孔板到96空板要细胞分散均匀,先用培养基把细胞稀释好,再把培养板放在适当的位置,加入细胞时和加入细胞后不移动培养板;如果空中有的地方没有培养基可吹打,但不要移动培养板,加入细胞后静置20-30分钟再移入培养箱。这样细胞一般都能长的很均匀。当然,前提是细胞消化的很好。
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