供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 500T |
货号: | BES20045BO |
CAS号: |
产品概述
活细胞/死细胞染色试剂盒是采用Calcein-AM/7-AAD双染细胞的方法染色活细胞和死细胞。 Calcein-AM是一种可对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂,Calcein-AM由于在Calcein的基础上加强了疏水性,因此能够轻易穿透活细胞膜。当其进入到细胞质后,酯酶会将其水解为Calcein留在细胞内,发出强绿色荧光。与其它同类试剂(如BCECF-AM和Carboxy-fluorescein diacetate)相比,Calcein-AM是最适合作为荧光探针去染活细胞的,因为它的细胞毒性很低,而且不会抑制任何的细胞功能,如增殖和淋巴球的趋化性。Calcein的激发和发射波长分别为490 nm和515 nm。Calcein -AM仅对活细胞染色。 作为核染色染料的7-AAD不能穿过活细胞的细胞膜,它穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核,并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光(激发:488,546nm,发射:647 nm),因此7-AAD仅对死细胞染色。 根据以上特点,Calcein, AM和7-AAD经常被结合用来作为活细胞和死细胞的双重染色。 一般试剂盒采用PI与Calcein联用,但是由于PI的发射波长是<625nm,通常在FL2中检测,对FITC的干扰大。而且由于波谱较宽,同时在FL3中也能测,所以用了PI最多再加一个FITC,FL3就没法用了。PI还有一个重要的缺点是不容易清洗干净,使用后清洗流式细胞仪更加费时费物。 7-AAD/Calcein AM试剂盒有效的解决了这些弊端,7-AAD的发射波长是650nm,只占用FL3通道进行检测,FITC、PE两个通道受影响都小,可以做三色分析。
保存温度
-20℃避光
注意事项
1.长期不用可以-20℃保存。
2.染色液Calcein AM注意防潮;避免反复冻融。
3.染色液为DMSO溶液,冬季气温较低时在室温时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解,吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。融解后离心至管底部再打开螺旋盖。
4.注意需要加热融解,变成液体状态后离心至管底部再开盖。可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。
5.试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
1年
检测方法
1.流式细胞仪
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
适用样本
1.悬浮细胞
2.贴壁细胞
产品应用
1.流式细胞仪
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
试剂准备
1.PBS 缓冲液(pH7.4,实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液(1X))
2.或者HBSS(Hank's Balanced Salt Solution)
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
2.染色液A为DMSO溶液,冬季气温较低时在室温时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解,吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。融解后离心至管底部再打开螺旋盖。
3.试剂A为了便于观察防止误操作导致损失,在试剂盒中时是采用透明管包装,收到后可以离心移入干燥黑色避光密封管或者用铝箔包裹避光。
4.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
5.由于Calcein-AM的工作液稳定性比较差,染色工作液必须现配现用,并且在当天用完。
6.Calcein-AM对湿度非常敏感,若是Calcein-AM溶液每次取完需要量后,必须紧紧密封盖子。建议根据单次用量,分装密封保存。不可使用含水的吸头。
7.试剂A母液请拧紧螺旋盖,避免受潮失效。
使用方法
1. 染色工作液的配制:
根据样品数按下列比例配制染色工作液。
用染料稀释液试剂C将染色液A和B分别10倍稀释。
用HBSS缓冲液或无血清培养基100倍稀释以上稀释过的染色液A,充分混匀,即成染色工作液A。
用HBSS缓冲液或无血清培养基20倍稀释以上稀释过的染色液B,充分混匀,即成染色工作液B。
2. 收集样本细胞。
3. 用PBS洗涤细胞两次。
4. 用200ul Calcein-AM染色工作液将细胞重悬。
5. 在37℃避光孵育15-30分钟。
6. 用PBS洗涤细胞。
7. 用200ul 7-AAD染色工作液将细胞重悬。
8. 在室温或37℃避光孵育5-10分钟。
9. 用PBS洗涤细胞。
10. 用适量PBS重悬细胞。
11. 用荧光显微镜或流式细胞仪检测结果。最da激发为490nm,最da发射波长为515nm和647nm。
结果分析 :
荧光显微镜下,使用488nm波长激发,活细胞为黄绿色,死细胞为红色。
用546 nm波长激发,仅能够看到红色的死细胞。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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