供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 100MG |
货号: | BES20114BO |
CAS号: |
产品概述
Brdu,也称为溴化脱氧尿苷,一种合成的胸苷类似物,在S期可替代胸腺嘧啶核苷选择性结合到细胞DNA中。从而检测细胞DNA合成和标记细胞分裂,凋亡等行为。 在遗传研究中Brdu可通过活体注射或细胞培养加载,然后使用抗Brdu的单克隆抗体进行特异性标记,ICC或IHC法染色法显示增殖细胞。另外,还能同时结合其它细胞标记物,双重染色,来判断增殖细胞的种类,增殖速度等,对研究细胞动力学有着重要意义。 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。
保存温度
2-8℃避光
有效期
两年
试剂准备
1.PBS 2.HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.使用方法需自行参考相关文献资料决定。请根据实验安排或参考文献使用。以下仅供参考。
使用方法
根据需要使用。以下仅供参考。
1. Brdu储存液的准备
用1X PBS充分溶解适量的Brdu配置10 mg/ml的母液,过滤除菌后,按照0.5ml/管的量分装放在-20°C或者-80°C长期保存,避免反复冻融。Brdu储存液再融化后,4°C可稳定存放一周。
2. 体内Brdu标记
1) 腹腔注射法(常用):无菌的10 mg/ml(溶于DPBS)适合用于体内注射用。按照100-200 μl(1-2 mg) Brdu的量腹腔注射到小鼠体内。注意:最短在注射后0.5 h后在小肠,胸腺和骨髓瘤处就能检测到Brdu。而一般在注射后24 h内几乎所有组织都能检测到Brdu。这个时间可能对于一些快速分化的组织如小肠来说有些久。
2) 根据自身的实验体系,在合适的时间点处死动物,摘除待研究的组织。使用冰冻切片或者石蜡包埋的方法进行组织处理和切片制备。然后进入后续的IHC染色步骤。
3. 体外Brdu标记(培养原代细胞或者细胞系)
1) 在96孔板上按标准步骤进行细胞培养,培养时间一般为1-72 h;
2) Brdu工作液的准备:用组织细胞培养液按照1:30的比例稀释储存液得到1mM Brdu工作液。然后取10 μl 1 mM Brdu溶液直接加入1 ml组织培养液即得到最终工作液。37°C温热。
3) 按100 μl/孔Brdu工作液的量进行细胞标记,37°C孵育60 min~过夜。同时设置非Brdu标记的细胞作为阴性对照。注意:zui佳的孵育时间取决于细胞增殖速度以及需要达到的实验目的。比如,对于快速增殖细胞(如HL-60)有效孵育时间为30-45min;对于原代细胞(如未受外源刺激培养的外周血淋巴细胞)孵育时间可能需要24 h。细胞密度zui好不要超过2x106 cells/ml。
4) 制备单细胞层玻片。
5) 将玻片置于70%冰乙醇放在-20°C下固定20-30 min。
6) PBS清洗细胞3次,每次5min。
7) 加入1.5M HCl中室温孵育30 min。
8) 吸去HCl,PBS清洗2次,每次5min。
9) 进入后续ICC染色步骤。
4. 体外Brdu标记(组织薄片)
1) Brdu工作液的准备:用组织细胞培养液按照1:30的比例稀释储存液得到1mM Brdu工作液。然后取10 -20 μl 1 mM Brdu溶液直接加入1 ml组织培养液即得到最终工作液。确保有足够的工作液(37°C温热)完全浸泡组织。
2) 用手术刀或者锋利的刀片将组织切割成约1 mm厚,2 mm2大小的薄片。建议在温热的培养基内进行切片,利于维持组织的活力。
3) 转移组织薄片至预装有10 ml Brdu标记液的15 ml离心管内。于37°,CO2 培养箱内孵育需要的时间。孵育时间可变,取决于组织薄片类型以及需要达到的实验目的(常用的为2-4 h)。直接丢弃未用完的标记液。
4) 37°C PBS清洗组织薄片,每次5 min。
5) 使用标准的冰冻切片或者石蜡包埋切片的方法固定组织。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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