供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 100T |
货号: | BES20202BO |
CAS号: |
产品概述
O11细菌活性氧(ROS)检测试剂盒是一种利用荧光探针O11进行活性氧检测的试剂盒。O11探针可自由透过细菌细胞膜进入细胞内,并被细菌细胞内的ROS氧化,产生绿色荧光物质,并稳定存在于细菌胞内。根据细菌细胞中绿色荧光的强弱,可以判断细菌细胞ROS含量的变化情况。 在激发波长488 nm,发射波长526 nm附近,使用荧光分光光度计、荧光酶标仪、荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪等可以检测荧光强度的设备,可以方便测定荧光强度情况,从而测定细菌胞内活性氧水平。 除了本绿色荧光检测的试剂盒以外,还可以提供红色荧光的检测试剂盒(相关产品:BB-461113)以及细菌培养上清的活性氧检测试剂盒。 活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括过氧化氢(H2O2,Hydrogen peroxide)、羟基自由基(•OH,Hydroxyl radical)、单线态氧(1O2,Singlet oxygen)、一氧化氮(NO,Nitric oxide)、超氧阴离子(•O2-,Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO• ,Peroxyl radical)、过氧羟自由基(HOO• ,hydroperoxyl)及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子(ONOO-,Peroxynitrite anion)、ClO-和羟化物等,参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。 活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生主要是氧化磷酸化的结果,在呼吸链中,在某些位点会有“泄露”的电子直接和氧气或和其他电子受体反应,在酶或非酶作用下引发一系列反应生成不同种类的活性氧:“泄露”的电子最初和氧气反应生成超氧阴离子自由基(O2•-)(图1A)。超氧阴离子遇水生成H2O2(图1B),同时过氧化氢也可由氧气在单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)的作用下生成(图1C),生成的过氧化氢在髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的催化下与Cl-反应可生成ClO-(图1D),在铁或铜离子的催化下发生Fenton反应生成OH•(图1E),超氧阴离子遇氮氧化物反应生成ONOO-(图1F)。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。 可以为您提供各种细胞样本、切片样本、组织样本的活性氧、活性氮检测试剂盒产品。 可以为您提供总活性氧、总活性氮和各种亚型的活性氧/活性氮的检测试剂盒产品。 可以为您提供各种绿色、红色、蓝色、深红色的活性氧/活性氮检测试剂盒产品。
保存温度
-20℃ 避光
注意事项
1.避免反复冻融。
2.可以根据需要分装后冻存。
3.探针为DMSO溶液,在2-8℃时是固体状态,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
有效期
6个月
检测方法
1.流式细胞仪2.荧光显微镜3.激光共聚焦
适用样本
细菌
产品特点
1.使用方便:可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测;
2.背景低,灵敏度高;
3.线性范围宽,使用方便。
仪器准备
1.激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪,
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
PBS缓冲液或者HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.黑色96孔板
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
2.荧光探针标记后,一定要洗净残余的未进入细胞内的探针,否则会导致背景较高。
3.探针标记完毕并洗净残余探针后,可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描,以确认探针的标记情况是否正常。
4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间,以减少各种可能的误差。
5.O11在光照和空气中易被氧化,注意避光密封保存。
6.对不同的细菌样本,应选择合适的孵育时间和浓度,以观察ROS的变化。应根据预实验情况调整染色浓度和时间。
使用方法
O11探针工作液配制:
1. 根据样本数量,用纯水将探针稀释液B进行10倍稀释。
2. 根据样本数量,用10倍稀释过的探针稀释液B将探针进行1000倍稀释。即配成染色工作液。
O11探针标记:
1. 准备1 ml新鲜待测菌液。
2. 将待测细菌样本离心收集菌体。
3. 用PBS洗涤菌体2-3次。离心收集菌体沉淀。
4. 用500 μl-1ml染色工作液重悬菌体。
5. 在37℃避光孵育30-45分钟。
6. 孵育结束后,离心收集菌体。
7. 用PBS清洗细胞一次。离心收集菌体。
8. 用500 μl PBS重悬菌体。充分混匀。
9. 取200 μl加入荧光检测用黑色96孔板。
10. 置于酶标仪中,后于激发波长为488 nm、发射波长526 nm检测荧光强度。
结果处理:
荧光强度强,细菌活性氧强度高。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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