供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 50T |
货号: | BES20223BO |
CAS号: |
产品概述
一氧化氮合酶(NOS)存在于内皮细胞、巨噬细胞、神经吞噬细胞及神经细胞中。因为一氧化氮很不稳定,因而研究生成一氧化氮的酶似乎更容易些,一氧化氮合酶的发现,大大促进了一些一氧化氮功能的研究。 一氧化氮合成酶(NOS)检测试剂盒是利用NOS 催化 L-Arg 和分子氧反应生成 NO,NO 反应生成有色化合物,在 530nm 波长下测定吸光度,根据吸光度的大小可计算出 NOS 活力。 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 可以为您提供各种颜色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。
保存温度
2-8℃避光
注意事项
开盖后组份按要求条件保存。
有效期
3个月
检测方法
分光光度计
适用样本
血清、血浆、细胞、组织
仪器准备
1.分光光度计
2.恒温水浴锅
3.漩涡混匀器
4.移液器
试剂准备
纯水
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.试管
使用注意事项
1.样本及试剂从冰箱取出,平衡至室温后使用;试剂D 和试剂E 必须37℃水浴至澄清透明,再进行操作,否则会影响结果。
2.试剂A 与配制好的试剂 B 工作液应尽量避免反复冻融。
3.试剂 B 工作液最hao现用现配,配好后尽量一日内用完,如有剩余则-20℃以下保存不超过一周;未配制之前的试剂 B1 和B2溶解液均应-20℃以下保存,如淡黄色或白色粉末变成咖啡色或黄褐色颗粒则失效不可用。
4.NOS 活性低,稳定性差,样品或匀浆上清如不马上检测,应置-20℃以下冷冻保存。
5.室温低时,NOS 试剂E 会出现浑浊,如果已经在测试管中加入了 NOS 试剂 E,可将测试管对着灯光,观察有无结晶或浑浊。如果有结晶或浑浊,请将每只测试管放到 37℃水浴锅中晃动 5 分钟,再比色。
6.所有实验用水均需使用纯水或双蒸水。
7.需使用一次性塑料试管,若没有,使用较新的玻璃管并彻底洗刷干净。
使用方法
试剂配制
1. 试剂A:临用前化冻摇匀。没有用完的试剂,可以-20℃以下避光冷冻保存以备下次再用。
2. 试剂 B 工作液配制:使用前取试剂 B2 溶解液一瓶600ul加入一支试剂B1粉剂中充分混匀(即将 1.5ml 小离心管反复颠倒,并将小离心管尖部的液体离心下来),测试后剩余的试剂可放入-20℃以下冷冻保存,时间不超过一周。
若发现粉剂变成黄褐色或咖啡色,则不可再用。
3. 试剂D:天冷后会凝固,待 37℃水浴变澄清时再使用。
4. 试剂E:室温低时会出现浑浊,待 37℃水浴加热至透明后再用。
操作步骤:
(二)、NOS酶活力计算公式:
A、血清中NOS酶活力计算::
(1)单位定义:每毫升血清每分钟生成 1nmol NO 为一个酶活力单位。
(2)计算公式:
总NOS活力(U/mL)= 总NOS测定管OD值—空白管OD值 x反应液总体积 x 1 ÷1000
呈色物纳摩尔消光系数 取样量 比色光径x反应时间
=总NOS测定管OD值—空白管OD值 x 2.41+X x 1 ÷1000
38.3x10-6 X 1x15
(3)计算举例:
取血清30ul按操作表进行检测,测得空白管吸光度为0.021,总NOS测定管吸光度为0.287,则计算结果为:
总NOS活力(U/mL)= 总NOS测定管OD值—空白管OD值 x反应液总体积 x 1 ÷1000
呈色物纳摩尔消光系数 取样量 比色光径x反应时间
= 0.287—0.021 x 2.41+0.03 x 1 ÷1000 =37.658 U/mL
38.3x10-6 0.03 1x15
B、组织NOS酶活力计算:
(1)单位定义:每毫克组织蛋白每分钟生成 1nmol NO 为一个酶活力单位。
(2)计算公式
总NOS活力(U/mgprot)= 总NOS测定管OD值—空白管OD值 x反应液总体积 x 1 ÷
呈色物纳摩尔消光系数 取样量 比色光径x反应时间
待测样本蛋白浓度(mgprot/L)
=总NOS测定管OD值—空白管OD值 x 2.41+ X x 1 ÷待测样本蛋白浓度(mgprot/L)
38.3x10-6 X 1x15
= 0.202—0.019 x 2.41+0.05 x 1 ÷(12.5x103)(mgprot/L)=1.254 U/mgprot
38.3x10-6 0.05 1x15
参考取样量:
1. 血清30ul。
2. 10%组织匀浆一般取50-100ul;
3. 细胞悬液一般取500ul,细胞培养液一般取100ul。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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