供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 200T |
货号: | BES20239BO |
CAS号: |
产品概述
活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括过氧化氢(H2O2,Hydrogen peroxide)、羟基自由基(•OH,Hydroxyl radical)、单线态氧(1O2,Singlet oxygen)、一氧化氮(NO,Nitric oxide)、超氧阴离子(•O2-,Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO• ,Peroxyl radical)、过氧羟自由基(HOO• ,hydroperoxyl)及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子(ONOO-,Peroxynitrite anion)、ClO-和羟化物等,参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。 活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生主要是氧化磷酸化的结果,在呼吸链中,在某些位点会有“泄露”的电子直接和氧气或和其他电子受体反应,在酶或非酶作用下引发一系列反应生成不同种类的活性氧:“泄露”的电子最初和氧气反应生成超氧阴离子自由基(O2•-)(图1A)。超氧阴离子遇水生成H2O2(图1B),同时过氧化氢也可由氧气在单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)的作用下生成(图1C),生成的过氧化氢在髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的催化下与Cl-反应可生成ClO-(图1D),在铁或铜离子的催化下发生Fenton反应生成OH•(图1E),超氧阴离子遇氮氧化物反应生成ONOO-(图1F)。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。 DHE活性氧(ROS)检测试剂盒是一种利用荧光探针DHE(Dihydroethidium)进行活性氧检测的试剂盒。DHE可自由透过活细胞膜进入细胞内,并被细胞内的ROS氧化,形成氧化乙啶;氧化乙啶可掺入染色体DNA中,产生红色荧光。根据活细胞中红色荧光的产生,可以判断细胞ROS含量的多少和变化。二氢乙啶在细胞内主要被超氧阴离子型ROS氧化,用流式细胞仪或荧光显微镜可直接观察,是一种快速简便的培养细胞中ROS经典检测方法。 在激发波长535nm,发射波长610 nm附近,使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测荧光,从而测定细胞内活性氧水平。 O系列活性氧探针具有多种颜色可以选择,可根据情况对样品进行多色标记实验。除了本试剂盒的红色荧光探针,还可以提供蓝色、绿色、深红色荧光的活性氧检测试剂盒。 可以为您提供各种细胞样本、切片样本、组织样本的活性氧、活性氮检测试剂盒产品。 可以为您提供总活性氧、总活性氮和各种亚型的活性氧/活性氮的检测试剂盒产品。 可以为您提供各种绿色、红色、蓝色、深红色的活性氧/活性氮检测试剂盒产品。 可以提供各种细胞分析试剂盒。包括细胞凋亡、活性、增殖、毒性、活性氧、周期、细胞代谢、氧化应激、膜流动性、膜电位、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、胞外酸化、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种细胞检测试剂盒产品。 可以为您提供各种细胞成像、细胞示踪与追踪试剂盒产品。包括各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。 可以提供各种细胞、组织染色,免疫组织化学,细胞培养等相关试剂盒产品。
保存温度
-20℃ 避光
注意事项
1.避免反复冻融。
2.可以根据需要分装后冻存。
3.探针为DMSO溶液,在2-8℃时是固体状态,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
有效期
6个月
检测方法
1.流式细胞仪2.荧光显微镜3.激光共聚焦
适用样本
1.悬浮细胞
2.贴壁细胞
产品特点
1.使用方便:可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测;
2.背景低,灵敏度高;
3.线性范围宽,使用方便。
仪器准备
1.激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪,
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
PBS缓冲液或者HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.黑色96孔板
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
2.荧光探针标记后,一定要洗净残余的未进入细胞内的探针,否则会导致背景较高。
3.探针标记完毕并洗净残余探针后,可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描,以确认探针的标记情况是否正常。
4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间,以减少各种可能的误差。
5.对于药物作用时间较短(2小时以内)的细胞,可以先标记探针,后用药物刺激细胞。对于药物作用时间较长(6小时以上)的细胞,先用相应的药物刺激细胞,后标记探针。注意避免具有氧化还原性的药物与探针反应。
6.DHE在光照和空气中易被氧化,注意避光密封保存。
7.对不同的细胞和组织,应选择合适的孵育时间和浓度,以观察ROS的变化。
使用方法
DHE探针配制:
1. DHE探针可在新鲜无血清培养基、各种缓冲盐溶液中稀释到所需浓度,1000-10000倍稀释,以此染色工作液更换细胞培养基;也可直接向细胞培养基中加入DHE探针溶液至所需浓度。
2. 依据细胞ROS含量的不同,DHE终浓度可选择在1000-10000倍稀释的范围,孵育时间可选择10-90 分钟,在37℃或室温进行避光孵育。
DHE探针标记:
原位标记:仅适用于贴壁培养细胞。
1. 按照1:1000-2000用无血清培养基稀释DHE探针。
2. 去除细胞培养基,用PBS洗细胞一次。
3. 加入适当体积稀释好的 DHE探针。加入的体积以能充分盖住细胞为宜,通常对于96孔板每孔加入100-200μl染色液,六孔板的一个孔加入稀释好的DHE探针不少于1毫升。
4. 在37℃细胞培养箱内避光孵育10-60分钟。
5. 用无血清细胞培养液洗涤细胞三次,以充分去除未进入细胞内的DHE探针。
收集后标记:悬浮细胞或贴壁细胞消化处理
1. 按照1:1000用无血清培养基稀释DHE探针。
2. 离心移除培养基,用PBS洗细胞一次。
3. 细胞收集后悬浮于稀释好的DHE探针中,细胞浓度为1*106-2*107/毫升,37℃细胞培养箱内避光孵育10-60分钟。每隔3-5分钟颠倒混匀一下,使探针和细胞充分接触。
4. 用无血清细胞培养基洗涤细胞三次,以充分去除未进入细胞内的DHE探针。
5. 用无血清细胞培养基重悬细胞。
荧光显微镜检测:
1. 对于原位标记探针的样品可以用荧光酶标仪检测,或者用激光共聚焦显微镜、荧光显微镜,直接拍照分析(需要有相关的荧光强度分析软件)。
2. 对贴壁生长细胞,可直接在荧光显微镜下观察;对悬浮生长细胞,取25-50μl细胞悬液滴到一张显微载玻片上,再盖上一张盖玻片。
3. 荧光显微镜下,用蓝光或绿光激发,观察和拍摄细胞红色发射图像,ROS阳性细胞在整个核区被染成红色;用紫外光激发时,胞浆中未氧化的二氢乙啶可发出蓝色荧光。
4. 实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。
5. 荧光强度强,活性氧含量高。
流式细胞仪分析:
1. 对贴壁生长细胞,用胰酶消化制备成单细胞悬液;对悬浮生长细胞,直接收集细胞。用0.5~1 ml冰冷PBS重悬细胞(5~10万)。收集细胞后标记探针然后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。
2. 采用480~535 nm波长激发,测定590 nm~610 nm以上的发射,细胞应可分成两个亚群:ROS阴性细胞仅有很低的荧光强度,ROS阳性细胞有较强的红色荧光。
3. 检测刺激前后荧光的强弱。
4. 荧光强度强,活性氧含量高。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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