供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 200T |
货号: | BES20240BO |
CAS号: |
产品概述
活性氧检测试剂盒是一种利用新型活性氧红色荧光探针O13进行活性氧检测的试剂盒。 O13 ROS探针在细胞中活性氧存在的条件下,被氧化生成红色荧光物质,红色荧光强度与细胞内活性氧水平成正比,检测O13产物的荧光强度就可以知道细胞内活性氧的水平。 本试剂盒中的O13 ROS探针为红色荧光的活性氧探针,具有510 / 610nm的最da激发/发射波长。 在激发波长510 nm,发射波长610 nm附近,使用荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪、激光共聚焦显微镜、荧光显微镜等检测O13产物荧光强度,从而测定细胞内活性氧水平。 活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括过氧化氢(H2O2,Hydrogen peroxide)、羟基自由基(•OH,Hydroxyl radical)、单线态氧(1O2,Singlet oxygen)、一氧化氮(NO,Nitric oxide)、超氧阴离子(•O2-,Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO• ,Peroxyl radical)、过氧羟自由基(HOO• ,hydroperoxyl)及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子(ONOO-,Peroxynitrite anion)、ClO-和羟化物等,参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。 活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生主要是氧化磷酸化的结果,在呼吸链中,在某些位点会有“泄露”的电子直接和氧气或和其他电子受体反应,在酶或非酶作用下引发一系列反应生成不同种类的活性氧:“泄露”的电子最初和氧气反应生成超氧阴离子自由基(O2•-)(图1A)。超氧阴离子遇水生成H2O2(图1B),同时过氧化氢也可由氧气在单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)的作用下生成(图1C),生成的过氧化氢在髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的催化下与Cl-反应可生成ClO-(图1D),在铁或铜离子的催化下发生Fenton反应生成OH•(图1E),超氧阴离子遇氮氧化物反应生成ONOO-(图1F)。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。 O系列活性氧探针具有多种颜色可以选择,可根据情况对样品进行多色标记实验。除了本试剂盒的红色荧光探针,还可以提供蓝色、绿色、深红色荧光的活性氧检测试剂盒。 可以为您提供各种细胞样本、切片样本、组织样本的活性氧、活性氮检测试剂盒产品。 可以为您提供总活性氧、总活性氮和各种亚型的活性氧/活性氮的检测试剂盒产品。 可以为您提供各种绿色、红色、蓝色、深红色的活性氧/活性氮检测试剂盒产品。
保存温度
-20℃ 避光
注意事项
1.避免反复冻融。
2.可以根据需要分装后冻存。
3.探针为DMSO溶液,在2-8℃时是固体状态,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
有效期
6个月
检测方法
1.流式细胞仪2.荧光显微镜3.激光共聚焦
适用样本
1.悬浮细胞
2.贴壁细胞
产品特点
1.使用方便:可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测;
2.背景低,灵敏度高;
3.线性范围宽,使用方便。
仪器准备
1.激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪,
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
PBS缓冲液或者HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.黑色96孔板
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
2.探针染色液为DMSO溶液,冬季气温较低时在室温时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解,吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
3.使用前,先将本品取出回温至室温,并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间,以减少各种可能的误差。
5.必须使用荧光检测专用的黑色96孔板。
使用方法
一、 探针标记
探针溶液可在新鲜无血清培养基、缓冲盐溶液中稀释到所需浓度,1000-10000倍稀释,以此染色液更换细胞培养基;也可直接向细胞孵育液体中加入探针溶液至所需浓度。
依据细胞ROS含量的不同,O13探针终浓度可选择在1000-10000倍稀释的范围,孵育时间可选择10-90 分钟,在37℃或室温进行避光孵育。
孵育结束后,用新鲜溶液清洗细胞。
原位标记:仅适用于贴壁培养细胞。
1. 按照1:1000-2000用无血清培养基稀释O13探针。
2. 去除细胞培养基,用PBS洗细胞一次。
3. 加入适当体积稀释好的O13探针。
4. 在37℃细胞培养箱内避光孵育20-40分钟。
5. 用无血清细胞培养液洗涤细胞三次,以充分去除未进入细胞内的O13探针。
6. 加入200 μL HBSS缓冲液。
7. 荧光酶标仪、荧光显微镜(含合适滤片)检测。
收集后标记:悬浮细胞或贴壁细胞消化处理
1. 按照1:1000用无血清培养基稀释O13探针。
2. 离心移除培养基,用PBS洗细胞一次。
3. 细胞收集后悬浮于稀释好的O13探针中,细胞浓度为1*106-2*107/毫升,37℃细胞培养箱内避光孵育20-40分钟。每隔3-5分钟颠倒混匀一下,使探针和细胞充分接触。
4. 用无血清细胞培养基洗涤细胞三次,以充分去除未进入细胞内的O13探针。
5. 用HBSS/PBS/无血清细胞培养基重悬细胞。
6. 用荧光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪检测。
活性氧检测:
1. 对于原位标记探针的样品可以用荧光酶标仪检测,或者用激光共聚焦显微镜、荧光显微镜,直接拍照分析(需要有相关的荧光强度分析软件)。
2. 或收集细胞后标记探针然后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。
3. 对于收集细胞后标记探针的样品可以用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测,用激光共聚焦显微镜直接拍照分析也可以(需要有相关的荧光强度分析软件)。
4. 使用488~535 nm激发波长,590 nm~610 nm发射波长,实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。
5. 荧光强度强,活性氧含量高。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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