供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 200T |
货号: | BES20243BO |
CAS号: |
产品概述
活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括超氧自由基、过氧化氢、及其下游产物过氧化物和羟化物等,参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。 DHR活性氧检测试剂盒是一种利用荧光探针DHR进行活性氧检测的试剂盒。DHR可自由透过活细胞膜进入细胞内,并被细胞内的ROS氧化,形成发绿色荧光的Rho123,并稳定存在于细胞内。根据活细胞中荧光的产生,可以判断细胞ROS含量的多少和变化。用流式细胞仪或荧光显微镜可直接观察,是一种快速简便的活细胞中ROS经典检测方法。 用488nm激发,使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测荧光,从而测定细胞内活性氧水平。 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 可以为您提供各种颜色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。
保存温度
-20℃ 避光
注意事项
1.避免反复冻融。
2.可以根据需要分装后冻存。
3.探针为DMSO溶液,在2-8℃时是固体状态,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
有效期
6个月
检测方法
1.流式细胞仪2.荧光显微镜3.激光共聚焦
适用样本
1.悬浮细胞
2.贴壁细胞
产品特点
1.使用方便:可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测;
2.背景低,灵敏度高;
3.线性范围宽,使用方便。
仪器准备
1.激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪,
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
PBS缓冲液或者HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.荧光检测专用黑色96孔板
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。2.荧光探针标记后,一定要洗净残余的未进入细胞内的探针,否则会导致背景较高。
3.探针标记完毕并洗净残余探针后,可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描,以确认探针的标记情况是否正常。
4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间,以减少各种可能的误差。
5.原位检测必须使用荧光检测专用的黑色透明底96孔细胞培养板。
6.以下操作步骤仅供参考,请根据实际样本情况调整或参考文献。
使用方法
DHR探针配制:
1. DHR探针可在新鲜无血清培养基、各种缓冲盐溶液中稀释到所需浓度,500-1000倍稀释,以此染色工作液更换细胞培养基;也可直接向细胞培养基中加入DHR探针溶液至所需浓度。
2. 依据细胞ROS含量的不同,DHR终浓度可选择在500-1000倍稀释的范围,孵育时间可选择20-120 分钟,在37℃或室温进行避光孵育。
DHR探针标记:
原位标记:仅适用于贴壁培养细胞。
1. 按照1:500-1000用无血清培养基稀释DHR探针。
2. 去除细胞培养基,用PBS洗细胞一次。
3. 加入适当体积稀释好的DHR探针。加入的体积以能充分盖住细胞为宜,通常对于96孔板每孔加入100-200μl染色液,六孔板的一个孔加入稀释好的DHR探针不少于1毫升。
4. 在37℃细胞培养箱内避光孵育20-120分钟。
5. 用无血清细胞培养液洗涤细胞三次,以充分去除未进入细胞内的DHR探针。
收集后标记:悬浮细胞或贴壁细胞消化处理
1. 按照1:1000用无血清培养基稀释DHR探针。
2. 离心移除培养基,用PBS洗细胞一次。
3. 细胞收集后悬浮于稀释好的DHR探针中,细胞浓度为1*106-2*107/毫升,37℃细胞培养箱内避光孵育20-120分钟。每隔3-5分钟颠倒混匀一下,使探针和细胞充分接触。
4. 用无血清细胞培养基洗涤细胞三次,以充分去除未进入细胞内的DHR探针。
5. 用无血清细胞培养基重悬细胞。
荧光显微镜检测:
1. 对贴壁生长细胞,可直接在荧光显微镜下观察;对悬浮生长细胞,取25-50μl细胞悬液滴到一张显微载玻片上,再盖上一张盖玻片。
2. 荧光显微镜下,用蓝光激发,观察和拍摄细胞绿色发射图像,ROS阳性细胞在整个核区被染成绿色。
流式细胞仪分析:
1. 对贴壁生长细胞,用胰酶消化制备成单细胞悬液;对悬浮生长细胞,直接收集细胞。用0.5~1 ml冰冷PBS重悬细胞(5~10万)。
2. 采用488nm波长激发,测定待测细胞平均荧光强度。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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