供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 100T |
货号: | BES20252BO |
CAS号: |
产品概述
活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括过氧化氢(H2O2,Hydrogen peroxide)、羟基自由基(•OH,Hydroxyl radical)、单线态氧(1O2,Singlet oxygen)、一氧化氮(NO,Nitric oxide)、超氧阴离子(•O2-,Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO• ,Peroxyl radical)、过氧羟自由基(HOO• ,hydroperoxyl)及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子(ONOO-,Peroxynitrite anion)、ClO-和羟化物等,参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。 活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生主要是氧化磷酸化的结果,在呼吸链中,在某些位点会有“泄露”的电子直接和氧气或和其他电子受体反应,在酶或非酶作用下引发一系列反应生成不同种类的活性氧:“泄露”的电子最初和氧气反应生成超氧阴离子自由基(O2•-)(图1A)。超氧阴离子遇水生成H2O2(图1B),同时过氧化氢也可由氧气在单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)的作用下生成(图1C),生成的过氧化氢在髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的催化下与Cl-反应可生成ClO-(图1D),在铁或铜离子的催化下发生Fenton反应生成OH•(图1E),超氧阴离子遇氮氧化物反应生成ONOO-(图1F)。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。 单线态氧检测试剂盒是利用单线态氧特异性荧光探针O21单线态氧探针检测单线态氧的试剂盒。单线态氧探针O21是合成的苯蒽类荧光探针,对单线态氧有高度的特异性,对其他活性氧物质,包括羟基自由基(HO•),超氧化物(•O2-)和一氧化氮(NO)等没有明显的反应。O21被单线态氧氧化生成绿色荧光物质,绿色荧光强度与单线态氧水平成正比,检测绿色荧光就可以知道单线态氧的变化情况。 单线态氧荧光探针O21主要用于检测液体内的单线态氧。可以用于评估自由基清除剂的功效。 单线态氧荧光探针O21不能自由穿过细胞膜,不能直接用于细胞单线态氧的检测。如果需要用于细胞检测,可以选择其它货号的产品,或者借助细胞破膜剂破膜后才能用于细胞的检测,进入细胞内后,与细胞内 单线态氧反应,生成绿色荧光物质,绿色荧光强度与细胞内单线态氧水平成正比,检测绿色荧光就可以知道细胞内单线态氧的变化情况。 在激发波长488 nm,发射波长526 nm附近,使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测绿色 荧光,从而测定细胞内单线态氧水平。 可以提供O22细胞膜通透性的单线态氧检测试剂盒,O22单线态氧荧光探针能自由穿过细胞膜,进入细胞后与细胞内酯酶反应生成新的单线态氧特异性荧光产物,反应细胞内单线态氧情况。 可以提供各种颜色的总活性氧检测产品,以及不同颜色的各种类型活性氧、活性氮的特异性检测产品。 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 可以为您提供各种颜色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。
保存温度
-20℃ 避光
注意事项
1.避免反复冻融。
2.可以根据需要分装后冻存。
3.探针为DMSO溶液,在2-8℃时是固体状态,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
有效期
6个月
检测方法
荧光分光光度计或荧光酶标仪
适用样本
液体样本
产品特点
1.使用方便:可用荧光分光光度计、荧光酶标仪快速检测;
2.背景低,灵敏度高;
3.线性范围宽,使用方便。
仪器准备
1.荧光分光光度计或荧光酶标仪,
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
PBS缓冲液或者HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.荧光检测专用黑色96孔板
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
2.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间,以减少各种可能的误差。
3.单线态氧探针O21在光照和空气中易被氧化,注意避光密封保存。
4.如果用于细胞检测,对不同的细胞和组织,应选择合适的孵育时间和浓度,以观察单线态氧的变化,很多细胞内的单线态氧绝dui水平较低,需要根据实际情况适当延长孵育时间。
5.单线态氧O21探针可以根据需要的用量分装后冻存,避免反复冻融。
6.单线态氧O21不可以一次性全部稀释后长期保存不用,稀释后稳定性变差,有效期缩短。
使用方法
液体样品单线态氧检测:
1. 取100ul待测液体样品,将0.5ul O21探针加入待检测液体样品,充分混匀。
2. 用荧光光度计或荧光酶标仪检测样品荧光情况。
绿色荧光强度与单线态氧水平成正比。
细胞样品检测:
单线态氧O21探针配制:
根据需要的用量,用无血清培养基200倍稀释单线态氧O21探针后充分混匀,避光保存备用。
细胞破膜:
1、 用破膜剂处理细胞。
2、 用PBS洗涤细胞2-3次。
单线态氧O21探针标记:
3、 单线态氧O21溶液可在新鲜无血清培养基、HBSS缓冲盐溶液中稀释到所需浓度,100-200倍稀释,以此染色液更换细胞培养液;也可直接向无血清细胞孵育液体中加入单线态氧O21探针溶液至所需浓度。
4、 依据细胞单线态氧含量的不同,单线态氧O21终浓度可选择在100-1000倍稀释的范围,孵育时间可选择1-2小时,在37℃或室温进行避光孵育。
5、 孵育结束后,用PBS等新鲜溶液清洗细胞或组织。漂洗时间要短。
荧光检测:
1、 对贴壁生长细胞或活组织,可直接在荧光显微镜下观察;对悬浮生长细胞,取25-50μl细胞悬液滴到一张显微载玻片上,再盖上一张盖玻片。
2、 用荧光光度计或荧光酶标仪或流式检测样品荧光情况。或者荧光显微镜/激光共聚焦下观察。
流式细胞仪分析:
1、 对贴壁生长细胞,用胰酶消化制备成单细胞悬液;对悬浮生长细胞,直接收集细胞。用0.5~1 ml冰冷PBS重悬细胞(5~10万)。
2、 采用488nm波长激发,测定待测细胞平均荧光强度。使用488nm激发波长,525nm发射波长,实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。探针O21的荧光光谱和FITC非常相似,可以用FITC的参数设置检测探针产物。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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