供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 100T |
货号: | BES20288BO |
CAS号: |
产品概述
丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法,MDA Assay Kit)又称脂质氧化(MDA)检测试剂盒,是采用一种基于MDA和硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid, TBA)反应产生红色产物的显色反应,广泛用于脂质氧化(lipid peroxidation)水平检测。丙二醛在较高温度及酸性环境中可与TBA发生反应,形成红色的MDA-TBA加合物,MDA-TBA加合物在535nm处有最da吸收,据此可以通过比色法进行检测。 MDA试剂盒是一种改进型的微量、快速、简便、准确、无毒害的测试方法。通过测试可反映出细胞、细胞培养上清、血清、血浆、乳汁等细胞外液、红细胞、白细胞以及各种动植物的细胞水平的脂质过氧化物的量。本试剂盒仅用于科研领域,不能用于临床诊断或其他用途。 机体通过酶系统与非酶系统产生氧自由基,后者能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid, PUFA),引发脂质过氧化作用,并因此形成脂质过氧化物。如:醛基(丙二醛MDA)、酮基、羟基、羰基、氢过氧基或内过氧基,以及新的氧自由基等。脂质过氧化作用不仅把活性氧转化成活性化学剂,即非自由基性的脂类分解产物,而且通过链式或链式支链反应,放大活性氧的作用。因此,初始的一个活性氧能导致很多脂类分解产物的形成,这些分解产物中,一些是无害的,另一些则能引起细胞代谢及功能障碍,甚至死亡。氧自由基不但通过生物膜中多不饱和脂肪酸(PUFA)的过氧化引起细胞损伤,而且还能通过脂氢过氧化物的分解产物引起细胞损伤。 因而测试MDA的量常常可反映机体内脂质过氧化的程度,间接地反映出细胞损伤的程度。MDA的测定常常与SOD的测定相互配合,SOD活力的高低间接反应了机体清除氧自由基的能力,而MDA的高低又间接反应了机体细胞受自由基攻击的严重程度。 可以提供各种细胞分析试剂盒。包括细胞凋亡、活性、增殖、毒性、活性氧、周期、细胞代谢、氧化应激、膜流动性、膜电位、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、胞外酸化、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种细胞检测试剂盒产品。 可以为您提供各种细胞成像、细胞示踪与追踪试剂盒产品。包括各种颜色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。
保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
开盖后组份按要求条件保存。
有效期
一年
检测方法
微孔板,酶标仪
适用样本
血清血浆/组织/细胞
产品特点
1.本试剂盒中试剂均无刺激性气味,对操作人员无任何毒害。
2.快速准确,操作简便,每小时可测100例以上样本。
3.灵敏度高,血清或血浆样品只需0.1 ml,或者更少。
4.再现性好,变异系数CV=1.5%,同一份标本数次测试结果相关极微。
5.呈色稳定,呈色后一天内测吸光度不变。
6.血清样品放置40℃,3~5天内测试结果不变。—70℃以下可保存个月至半年。
7.测试面广,可测血清、血浆、各种组织匀浆,培养细胞等。
8.不需昂贵与特殊仪器,只需恒温水浴箱或铝锅、铝盆开盖煮沸,及721、722、751、752分光光度计任一型号均可。
9.稳定,不受气温等外界因素的影响。
产品应用
微孔板,酶标仪
仪器准备
1.酶标仪
2.恒温水浴锅
3.离心机
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.生理盐水
2.双蒸水
3.PBS缓冲液
4.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.96孔板
使用注意事项
1.必须使用干净的试管。
2.配制试剂时要充分混匀,加样或加试剂时要垂直加入试剂中,避免加到管壁。
3.水浴时间和温度必须固定。
4.血浆、血清或尿液样品制备后可以直接用于MDA测定。
5.组织或细胞可以使用PBS或裂解液进行匀浆或裂解。对于组织,组织重量占匀浆液或裂解液的比例为10%;对于细胞,每100万细胞使用0.1ml裂解液或匀浆液。匀浆或裂解后,1600g离心10分钟取上清用于后续测定。匀浆或裂解等样品制备步骤宜在冰浴或4℃进行操作。
6.对于组织或细胞样品,样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的MDA含量。
7.95℃水浴最hao用带盖试管,如无带盖试管,可用保鲜膜扎口,水浴时用针扎一小孔。
8.试剂A温度低时会凝固,使用前水浴加热溶解至透明。
9.测定样品吸光度值较低时,可将水浴延长至80min,但应同时延长,以免造成批间差异。
10.避免使用EDTA、枸橼酸、氟化钠、草酸等抗凝剂。
11.待测样本如不能及时测定,应置于-20℃保存,4天内稳定。
使用方法
样品测定:
1. 样品处理
①血清、血浆、尿液、脑脊液样本:从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血,直接检测,如超过线性范围,用生理盐水或者PBS稀释后检测。
②组织、细胞等样本:组织或细胞可以使用PBS的RIPA裂解液等进行匀浆或裂解。
匀浆或裂解组织时,组织重量占匀浆液或裂解液的比例应为10%;
对于细胞,每106 个细胞使用0.1 ml裂解液或匀浆液。匀浆或裂解后,1600×g离心10 min,取上清用于后续测定。
匀浆或裂解等样品制备步骤宜在冰浴或4℃进行操作。
样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的MDA含量。
2. 试剂配制:
TBA工作液的配制: 称取适量TBA,用TBA稀释液配制成浓度为0.68%的TBA工作液。TBA工作液需完全溶解后再使用,可以加热到60-70℃促溶,并可通过反复剧烈Vortex促溶。
配制好的TBA工作液4℃避光保存,1个月内有效。
3. 稀释标准品:
取适量MDA标准品(1mM)用恰当溶液稀释至1、2、5、10、20、50 μM(如果进行简易快速检测,标准品直接稀释10 μM)。
4. MDA检测工作液的配制:临检测前,根据待测定的样品数(含对照),参考下表新鲜配制适量的MDA检测工作液。
5. 样品测定:
离心管或其它适当容器内加入0.1 ml匀浆液、裂解液、PBS、生理盐水等适当溶液作为空白对照。加入0.1 ml 上述不同浓度标准品用于制作标准曲线,加入0.1 ml样品用于测定;随后加入4.14 ml MDA检测工作液。
在带盖试管中按下表配制检测反应体系:
6. 混匀, 加盖,95℃水浴煮沸40 min,加热时务必注意避免液体暴沸溅出。如果使用加热块(Heat block)进行加热注意用重物压紧离心管盖;如果使用沸水浴,则需使用可把盖子锁死的离心管或螺旋盖离心管,或用Parafilm封住离心管口,用针头刺一小孔。最方便和准确的加热方法是使用带有热盖并可以加热金属浴。
7. 水浴或流水冷却至室温。
8. 在3000×g离心15分钟或4000×g离心10分钟。
9. 取上清,双蒸水调零,用酶标仪检测535 nm处吸光值。96孔板每孔加200 μl上清液。分别记为A空白、A标准、A样品。
结果计算:
对于血浆、血清或尿液等样品可以直接根据标准曲线计算;也可以简易快速检测方法,采用如果进行简易快速检测,直接以10 μM标准品进行计算,获得MDA的摩尔浓度。
对于细胞、或组织样品,计算出样品溶液中的MDA含量后,可以通过单位重量的蛋白含量或组织重量等来表示最初样品中的MDA含量,例如μmol/g蛋白或组织。
简易快速血清、血浆、尿液等液体样品中MDA含量计算公式:
血清中MDA含量(μmol/L)
=(A样品-A空白)÷(A标准-A空白)×10 × 样品测试前稀释倍数
简易快速细胞、组织样品中MDA含量计算公式:
组织细胞中MDA含量(μmol/g)
=(A样品-A空白)÷(A标准-A空白)× 10 ÷ 样品蛋白浓度(mg/ml)
式中:
A样品=样品孔的吸光度
A标准=标准孔的吸光度
A空白=空白孔的吸光度
参考区间:
健康成年人血清MDA:9.58±2.15 μmol/L 血浆MDA:7.31±1.27 μmol/L
参考取样量:
血清(浆)尿液取0.1 ml;
低密度脂蛋白悬液取0.1~0.2 ml。
食用油取0.03 ml;
细胞悬液细胞上清0.1~0.2 ml。
肝组织、心肌、肌肉组织等,取5%或10%匀浆0.1~0.2 ml较好。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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