供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 100T |
货号: | BES20322BO |
CAS号: |
产品概述
H+、K+-ATPase对胃酸的分泌及胃的消化功能具有重要的生理意义。70年代Forte等人首先在牛蛙胃粘膜上分离出一类能被K+专一激活而不被乌本苷抑制的ATPase,即H+、K+-ATPase。随后Lee•J等人又证明了含有该酶的膜囊泡运动跨膜运输质子的作用,从而为胃酸分泌的机理奠定了分子学基础。H+、K+-ATPase定位于胃粘膜壁细胞上,属于第二类质子泵,它通过自身的磷酸化(E1→E2)与去磷酸化(E2→E1)完成的H+/K+电中性跨膜离子转运,不断将壁细胞内的质子运输到膜外行使泌酸的功能。 ATP酶可分解ATP生成ADP及无机磷,测定无机磷的量可判断ATP酶活力的高低。 H+K+—ATP酶是一种能被钾专一激活而不被乌本苷抑制的ATP酶。 可以提供各种细胞检测试剂盒。包括细胞凋亡、活性、增殖、毒性、活性氧、周期、细胞代谢、氧化应激、膜流动性、膜电位、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、胞外酸化、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种细胞检测试剂盒产品。 可以为您提供各种颜色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。
保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
开盖后组份按要求条件保存。
有效期
6个月
检测方法
分光光度计
适用样本
组织、细胞样本
产品应用
分光光度计
仪器准备
1.分光光度计
2.恒温水浴锅
3.离心机
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
7.涡旋混匀器
试剂准备
1.纯水
2.生理盐水
3.BCA蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
2.实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.该试剂盒具有微量、灵敏及快速的特点。所用的试管不能含有磷。如果试管放过磷酸或磷酸缓冲液,一定要洗的非常干净,最hao用一次性塑料或新玻璃管,避免磷污染是检测成败的关键;
4.定磷剂配好后,不可放置太久,一般保存1-5天,最hao现配现用,随时放冰箱;
5.最hao采用先配A、B两种混合液,然后按简化操作步骤进行检测。快捷准确。
6.所有配试剂的器皿均要专用,包括吸硫酸的吸管及盛水的器皿。
使用方法
试剂配制:
粉剂D,用时每支加纯水至5ml,现用现配,剩余的-20℃可存放一周;
粉剂E,用时每支加纯水至5ml,适当加热溶解,4℃冰箱保存;
试剂G,用时每支加纯水至25ml,室温保存;
粉剂H,用时每瓶加纯水至40ml溶解,溶解后4℃冰箱可保存一周;
粉剂I,用时每瓶加纯水至100ml溶解,室温保存;
0.5umol/ml 标准磷工作液的配制:
用时将试剂K储备液用纯水1:19稀释,即取0.5ml储备液加纯水定容至10ml;
定磷剂的配制:
按纯水:2.5mol/L硫酸:试剂H:试剂I=2:1:1:1的比例配制。
配好后的定磷剂应为浅黄色,若无色则试剂无效,若蓝色则为磷污染。
定磷剂需现用现配。
样本的前处理:
准确称取胃黏膜组织重量,按重量(g):体积(ml)=1:9的比例,加入9倍体积的生理盐水,冰水浴条件下制备成10%的组织匀浆液,2500转/分,离心10min,取上清液,再用生理盐水5倍稀释成2%的浓度待测。
酶活性计算:
1. 定义:规定每小时每毫克组织蛋白的ATP酶分解ATP产生1umol无机磷的量为一个ATP酶活力单位,即微摩尔磷/毫克蛋白/小时(umol Pi/mgprot/hour)
2. 计算公式
H+、K+ -ATPase活力= 测定管OD值 – 对照管OD值X 标准管浓度 X 反应体系中 (U/mgprot) 标准管OD值 (0.5umol/ml) 样本稀释倍数(4.8)X 6 ÷ 待测样本蛋白含量(mgprot/ml)
注:
(1). 反应体系中样本稀释倍数= 反应总体积 = 130+80+40+40+40+50+100 =4.8 倍取样量 100
(2). 反应时间为10min,乘以6为1小时。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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