供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 50T |
货号: | BES20564BO |
CAS号: |
产品概述
溶酶体pH(Intracellular pH,pHi)是酶活性和细胞功能的重要生理决定因素,所有蛋白质都依赖于严格调节的pH值以维持其结构和功能。质子 - 去质子化可以指示生物表面的电荷,并且是许多代谢反应中的组成部分。细胞已经开发出多种机制来保持pHi的窄范围,以响应pH值的细胞内和细胞外波动。 溶酶体pH值检测试剂盒采用P02溶酶体pH值荧光探针检测溶酶体pH值的变化。P02是pH敏感的荧光染料,在采用黄绿色发射光检测时,其荧光强度随着pH值降低而增强,反之碱性条件下变低,从而P02可被用于监测溶酶体pH变化,见图一。 市面上现有的pH探针不适用于研究酸性细胞器如溶酶体,内涵体,精子和顶体,因为它们的荧光在较低pH下显著降低。另外,市面上现有的pH探针不能选择性地定位于酸性细胞器中。P02是研发的适合溶酶体pH检测的荧光探针,它是一种可以穿透细胞膜的荧光染料,是一种嗜酸性的荧光染料,它在较低的pH下发出强烈的黄绿色荧光。P02进入细胞后,会产生特异性的溶酶体聚集。产生的荧光物质最da激发波长为 385nm,最da发射波长为 540nm,其在不同的pH值条件下发射的荧光强度不同,从而可以反映溶酶体pH值的变化情况。 P02主要用于哺乳动物细胞的研究。在有溶酶体pH变化的细胞毒性、细胞凋亡、细胞粘附、药物抵抗、细胞趋化等过程中也可应用。实际检测时推荐使用的激发波长为380-405nm左右,发射波长为 525~550nm。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测溶酶体pH值的变化。
保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
1.探针液长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
2.探针液需要长期保存时可以根据使用情况进行小量分装后-20℃保存。
3.探针A为DMSO溶液,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
4.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
5.试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
6个月
检测方法
流式细胞仪//激光共聚焦/荧光显微镜
适用样本
细胞
产品应用
流式细胞仪//激光共聚焦/荧光显微镜
仪器准备
1.流式细胞仪或激光共聚焦或荧光显微镜
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液 2.HBSS 3. (备选)Nigericin sodium salt
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。使用前,先将本品取出回温至室温,并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
2.pH探针为DMSO溶液,冬季气温较低时在室温时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解,吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
3.P02探针容易受潮,受潮后稳定性较差,注意干燥保存。
4.吸取P02探针母液时要用干燥的新吸头,不能使用含水的吸头。
5.未使用完的P02探针母液请拧紧螺旋盖,避免受潮失效。
6.P02探针工作液含水,配制后不可以长期保存,须现配现用。
7.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
8.标记的条件因细胞种类而异,根据不同样本的实际染色结果做相应调整,在每次实验前,请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化,确定最jia条件。以下方法仅供参考。
9.荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
10.染色后立即进行分析。
11.可以在染色溶液中加入等体积的20% Pluronic F127溶液,Pluronic F127 可以帮助P02更快进入细胞,不建议在Pluronic F127中长期保存 P02溶液。
12.本试剂盒主要用于溶酶体pH值变化的定性检测。但是在一定pH值范围内荧光强度与溶酶体pH有良好的线性关系,从而可以换算出溶酶体的pH值的具体数据。
使用方法
1. 染色工作液的配制:
根据样品数,用探针稀释液将P02探针进行10倍稀释, 然后再用HBSS缓冲液稀释P02溶液50倍-100倍,配制成P02染色工作液。
2. 将P02染色工作液加入已处理好的细胞,在37℃孵育1-5 分钟。
3. 然后用该细胞进行荧光溶酶体pH变化情况检测。
激发波长 360-405nm,发射波长525-550nm。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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