供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 50T |
货号: | BES20707BO |
CAS号: |
产品概述
溶酶体是由一层单位膜包围,内含多种酸性水解酶的泡状结构。溶酶体含有40多种水解酶,其中包括蛋白酶、核酸降解酶和糖苷酶等。其主要功能是对细胞内物质的消化作用。此外溶酶体与器官形成、激素分泌的调节以及某些疾病的发生密切相关。 溶酶体蛋白提取试剂盒提供全套试剂,可用于各种动物细胞和实体软、硬组织样本的溶酶体蛋白提取。适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织,如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织中提取溶酶体总蛋白。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA,与金属螯和层析等下游应用兼容。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
动物细胞/组织
产品特点
1.使用方便,从细胞,组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2.提取过程简单方便。
3.含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
5.总蛋白提取液含多种有效成分,可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白,又可结合释出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64,每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项:
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
如果试剂盒不能短时间内用完,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测,提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂,注意提取过程保持低温操作,缩短离心时间。
使用方法
提取液准备:
每200ul冷的蛋白提取液C中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
细胞溶酶体蛋白提取:
1. 取1-2×107个细胞,在4℃,500×g条件下离心2-3分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞;
2. 用冷PBS洗涤两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 加入500μl-1000ul冷的试剂 A,置冰上振荡10分钟。
4. 用Dounce匀浆器匀浆30-40下。
5. 在4℃,1000×g力条件下离心5分钟,弃沉淀,留上清。
6. 将上清在4℃,4000×g力条件下离心10分钟,弃沉淀,留上清。
7. 将上清在4℃,20000×g力条件下离心20分钟,弃上清,留沉淀。
8. 在沉淀中加入500μl冷的试剂B,混匀。
9. 在4℃,20000×g力条件下离心20分钟,弃上清,留沉淀。
10. 在沉淀中加入100-200ul蛋白提取液C,充分混匀。
11. 轻微振荡15-30分钟。
12. 在4℃,12000×g条件下离心15分钟。
13. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即得到溶酶体总蛋白。
14. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
组织溶酶体蛋白提取:
1. 取50-100mg新鲜动物组织样本,用PBS洗涤干净。
2. 用剪刀尽可能剪碎,用冷PBS洗涤两次。
3. 加入500μl-1000ul冷的试剂 A,置冰上10分钟。
4. 用Dounce匀浆器匀浆30-40下,至无明显可见固体。
5. 在4℃,1000×g力条件下离心5分钟,弃沉淀,留上清。
6. 将上清在4℃,4000×g力条件下离心10分钟,弃沉淀,留上清。
7. 将上清在4℃,20000×g力条件下离心20分钟,弃上清,留沉淀。
8. 在沉淀中加入500μl冷的试剂B,混匀。
9. 在4℃,20000×g力条件下离心20分钟,弃上清,留沉淀。
10. 在沉淀中加入100-200ul蛋白提取液C,充分混匀。
11. 轻微振荡15-30分钟。
12. 在4℃,12000×g条件下离心15分钟。
13. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即得到溶酶体总蛋白。
14. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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