供货周期: | 7天 |
品牌: | 博尔森 |
型号: | 50T |
货号: | BES20762BO |
产品概述
线粒体(mitochondria)是真核细胞中由两层膜包被的细胞器,是细胞中制造能量的重要细胞器结构,是细胞进行有氧呼吸的主要场所。细胞中的能源物质—脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化,并通过偶联磷酸化生成ATP,供给细胞生理活动之需。对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行。 植物线粒体蛋白提取试剂盒提供全套试剂,用简便快速的方法即可在1小时内提取得到植物线粒体蛋白。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解线粒体膜组份。 本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
植物
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项:
? 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
? 蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
? 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
? 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
? 如果试剂盒不能短时间内用完,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
使用方法
1. 提取液准备:
每200 μl预冷的蛋白提取液C中加入1 μl蛋白酶抑制剂,混匀后置冰上备用。
2. 取200-500mg新鲜植物样本叶片,用PBS洗净擦干后去除叶梗和粗脉。用手术剪刀尽可能剪碎。
3. 加入1ml提取液A后用匀浆机充分匀浆或者加适量提取液A后用匀浆机/Dounce匀浆器充分匀浆。
4. 将匀浆液用100 μm细胞筛过滤。
5. 将滤液在500×g离心5分钟,弃沉淀,取上清。
6. 将上清在800×g条件下离心5分钟,弃沉淀,收集上清。
7. 将上清在2000×g条件下离心5分钟,弃沉淀,收集上清。
8. 将上清12000×g离心20分钟。弃上清,收集沉淀。
9. 将沉淀用500 μl试剂B重悬。
10. 将悬液12000×g力离心20分钟,弃上清,收集沉淀。
11. 在沉淀中加入100-200 μl线粒体蛋白提取液C,充分混匀。
12. 在4℃条件下振荡20-40分钟。
13. 在4℃,14000×g条件下离心15分钟。
14. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到线粒体蛋白。
15. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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