供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 50T |
货号: | BES20777BO |
CAS号: |
产品概述
植物高尔基体膜蛋白提取试剂盒提供全套试剂,适用于从各种植物组织样本的高尔基体膜蛋白提取。提取过程简单方便,可在1小时内完成。提取的膜蛋白不仅纯度高,保持天然活性,而且绝少交叉污染。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA,与金属螯和层析等下游应用兼容。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
植物
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项:
? 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
? 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
? 最好使用Dounce匀浆器匀浆,如果没有Dounce匀浆器,用普通玻璃匀浆器匀浆也可,但是蛋白回收率会下降。
? 提取液C在使用前须一直置于2-8℃条件,否则下游膜蛋白提取时会导致不容易分层。
? 膜蛋白电泳时loading buffer应该避免煮沸。
? 膜蛋白电泳时可以提高loading buffer的SDS含量。
? 离心机转速有相对离心力(RCF,×g)和每分钟转速(RPM,r/min)两种表示方式,有些离心机设置有RPM和×g显示切换,但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算:
g=r×1.118×10-5×rpm2 (r 为有效离心半径,即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度,单位为厘米) 例如: 转速为3000rpm,有效离心半径为10 cm,则相对离心力(RCF,×g)为=10×1.118×10-5×30002=1006.2(×g)。
使用方法
1. 提取液准备:
每500 μl冷的蛋白提取液C中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2. 取100-200 mg新鲜植物叶片组织样本,用PBS洗涤干净。
3. 用剪刀尽可能剪碎,用冷PBS洗涤两次。
4. 加入1000 μl冷的试剂 A,置冰上10分钟。
5. 用匀浆机/匀浆器充分匀浆。
6. 匀浆液在4℃,1000×g力条件下离心5分钟。弃沉淀,收集上清。
7. 上清在4℃,3000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀,将上清吸入另一预冷的干净离心管。
8. 将上清在4℃,6000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀,收集上清。
9. 上清在4℃,50000×g力条件下离心20分钟。弃上清,留沉淀。
10. 在沉淀中加入500 μl冷的试剂B,混匀。
11. 在4℃,50000×g力条件下离心30分钟。弃上清,收集沉淀。
12. 在沉淀中加入400 μl蛋白提取液C,吹打混匀后,在4℃条件下振荡15-30分钟,至沉淀充分裂解,无明显沉淀。
13. 在4℃,12000×g条件下离心5分钟。
14. 将上清吸入另一干净离心管,在37℃水浴(气浴)15分钟。
15. 在37℃, 1000×g离心5分钟。此时溶液分为2层,下层是膜蛋白约为30-50 μl。
16. 小心移除上层,留下下层大约40 μl液体。
17. 用50-100 μl膜蛋白溶解液D溶解下层,即可得到高尔基体膜蛋白样品。
18. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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