供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 5 ML |
货号: | BES21002BO |
CAS号: |
产品概述
His标签蛋白纯化试剂盒提供全套试剂,适用于从各种样品中纯化带有6*His标签的蛋白。本试剂盒填料支持物为CL-6B琼脂糖凝胶,载量为20mg His标签蛋白/ml填料。 本试剂盒包含Ni-Agarose填料、亲和柱空柱以及可溶性His融合蛋白纯化所需的全部试剂(细菌裂解液、蛋白酶抑制剂混合物、结合缓冲液和洗脱缓冲液组分),使用方便。该镍柱纯化系统对6×His-tag蛋白具有显著特异吸附能力,能够高效一步纯化带有6个组氨酸亲和标签的蛋白。该系统具有4个Ni2+螯合位点,较只有3个螯合位点的Ni-IDA结合Ni2+ 更为牢固,有效防止纯化过程中Ni2+脱落且增强对His标签蛋白的结合能力,提高纯化效率。较高的基团密度,大大提高了蛋白载量。该系统在天然或变性条件下,对来源于各种表达系统(如杆状病毒,哺乳细胞,酵母以及细菌)中的His标签蛋白,均有很好的纯化效果。 本产品已螯合镍离子,可直接用可溶性蛋白的纯化,使用方便,快捷。使用pH为3-13的范围内都能有好的纯化效果, pH2和pH14的条件下也可以短期使用。填料可重复使用。 本试剂盒只适合于可溶性蛋白的纯化,如需纯化包涵体蛋白,请选择我公司的其他货号的包涵体蛋白纯化试剂盒。 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。 可以提供针对下游实验不同应用的试剂盒,例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒;含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒;专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒供选择使用。 可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。 可以提供蛋白浓缩、脱盐、沉淀、透析、定量、电泳、纯化、检测等不同蛋白样品处理检测等相关试剂盒。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂-20℃保存;
2.其他2-8℃保存;避免冷冻。
有效期
一年
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
纯水
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.在纯化之前采用电泳检测蛋白的可溶性,本试剂盒只适合于可溶性蛋白的纯化,如需纯化包涵体蛋白,请选择我公司的其他货号的包涵体蛋白纯化试剂盒。
2.样品中不能含有β-巯基乙醇、DTT和EDTA、EGTA等。
3.整个纯化过程中切忌凝胶脱水变干。
4.为提高纯化效率,首先确定Binding Buffer和Elution Buffer中咪唑的最jia使用浓度。必要时可以使用线性或梯度浓度的咪唑浓度,Binding Buffer的范围为0-10 mM,洗脱缓冲液的范围为10-500 mM来进行。并通过SDS-PAGE或Western Blotting来检测目的蛋白的纯度。
5.请使用高纯度的试剂配制缓冲液,并通过0.22 μm或者0.45 μm过滤器过滤。为避免柱子被堵塞,建议将裂解液进行离心,或者使用0.22 μm或者0.45 μm过滤器过滤。
6.柱再生时,保证每步洗完后都要用足够的去离子水冲洗至中性。
7.蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
使用方法
缓冲液的准备
可溶性蛋白纯化缓冲液配方:
Component Tris-HCl(pH7.9) Imidazole NaCl
Binding Buffer 20 mM 10 mM 0.5 M
Elution Buffer 20 mM 500 mM 0.5 M
组装层析柱
1. 将Ni-Agarose Resin填料混匀后加入层析柱,室温静置10分钟,待凝胶与溶液分层后,把底部的出液口打开,让乙醇通过重力作用缓慢流出。
2. 向装填好的柱中加入5倍柱体积的去离子水将乙醇冲洗干净后,再用10倍柱体积的Binding Buffer平衡柱子,平衡结束后即可上样。
可溶性蛋白的纯化
1. 收集菌体后,每100 mg菌体(湿重)加入1-5 ml细菌裂解液(每1 ml 细菌抽提试剂中已加入10 μl 蛋白酶抑制剂混合物),超声裂解菌体。
2. 10000 rpm,4℃离心3分钟,收集上清中的可溶性蛋白。
3. 用Binding Buffer将菌体裂解液等倍稀释后负载上柱,流速为10倍柱体积/小时,收集流穿液。
4. 使用15倍柱体积的Binding Buffer冲洗柱子,洗去杂蛋白。
5. 使用适量Elution Buffer洗脱,收集洗脱峰。
6. 洗脱后,依次使用10倍柱体积的去离子水洗涤柱子,再用3倍柱体积的20%乙醇平衡(乙醇要将填料浸没),封柱后2-8℃保存。
柱再生
当填料使用多次后,结合效率会有所下降(表现为流速变慢或填料失去蓝绿色),可以用以下方法再生,提高填料的使用寿命和蛋白质的结合效率。
1. 使用2倍柱体积的6 M盐酸胍冲洗后,使用3倍柱体积的去离子水冲洗。
2. 使用1倍柱体积的2% SDS冲洗。
3. 依次使用1倍柱体积的25%、50%、75%和5倍柱体积的100 %乙醇冲洗,再依次使用1倍柱体积的75%、50%和25%的乙醇冲洗。
4. 使用1倍柱体积的去离子水冲洗。
5. 使用5倍柱体积含50 mM EDTA缓冲液(PH8.0)冲洗。
6. 使用3倍柱体积去离子水,3倍柱体积20%乙醇冲洗。
7. 置2-8°C保存。
8. 再次使用前,需首先使用10倍柱体积去离子水冲洗,然后使用5个柱体积的50 mM NiSO4再生,3个柱体积的Binding Buffer平衡。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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