供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 20T |
货号: | BES21134BO |
CAS号: |
产品概述
蛋白快速银染试剂盒(Protein Fast Silver Stain Kit)是一种快速的可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白银染染色的试剂盒,该试剂盒含有增敏步骤,可明显降低背景。 本试剂盒操作简单、快速;可用于2D凝胶的银染,并可进行后续的质朴检测;目的条带清晰;不含甲醇。可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。可以提供针对不同下游实验应用的试剂盒,例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒;含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒;专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒可供选择。还可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。
保存温度
2-8℃
注意事项
试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
六个月
仪器准备
1.摇床
2.移液器
3.冰箱
4.冰盒
试剂准备
1..冰醋酸
2.纯水(超纯)
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.背景过深:①显色时间过长;②洗涤不充分;③凝胶中残留物质未去除干净;④纯水的纯度过低。
2.蛋白条带较浅:①蛋白的半胱氨酸含量过低;②银染后水洗时间过长;③蛋白量较低;④固定后的洗涤时间不够,导致乙酸残留。
3.凝胶上出现杂质或非蛋白的印迹:①凝胶没有被充分浸没,应加入足量溶液;②容器没有清洗干净;③凝胶接触金属物质;④指纹或其他压迹。
4.本染色液呈酸性,有轻微腐蚀性,使用时请作必要防护。
使用方法
1. 试剂制备:
提前配制固定液,按无水乙醇:冰乙酸:纯水=5:1:4的比例配制。
提前配制洗涤液,按无水乙醇:纯水=1:4的比例配制。
2. 水洗:电泳结束后,取凝胶放入纯水中清洗2次,每次5min。
3. 固定:取凝胶放入50~100ml固定液中,在摇床上室温摇动15~20min,重复固定步骤1次。
4. 洗脱:取凝胶放入洗涤液中清洗2次,每次5min。
5. 水洗:纯水清洗凝胶2次,每次5min。
6. 增敏:配制银染增敏工作液,取组分A:Silver Stain Sensitizer(500×)0.1ml加入到50ml纯水中,混匀,即1×Silver Stain Sensitizer,一般应2h内用完。
室温下用1×Silver Stain Sensitizer孵育凝胶2min,立即用纯水清洗凝胶2次,每次1min。
7. 银染:配制银染工作液,取组分B:Silver Stain(100×)0.5ml加入到50ml纯水中,混匀,即得1×Silver Stain,一般应2h内用完。取凝胶入1×Silver Stain,在摇床上室温摇动10~20min。
8. 水洗:弃银染工作液,在摇床上用纯水清洗凝胶2次,每次30s,摇动速度在60~70rpm。总的水洗时间应控制在1.5min内。
9. 显影:配制银染显影工作液,取组分C:Silver Stain Developer(5×)10ml加入到40ml纯水中,混匀,即1×Silver Stain Developer,一般应30min内用完。清洗凝胶后,立即置于1×Silver Stain Developer中,室温孵育2~10min,直至蛋白条带清晰可见。一般显色30s后就会出现棕色沉淀,继续显影2~3min,亦可延长至5min以上,如果显影效果不佳,可重新更换1×Silver Stain Developer继续显影。
10. 弃银染显色液,迅速用纯水清洗凝胶以避免显影过度,背景染色。立即加入100ml Silver Stain Stop Buffer (1X),在摇床上室温摇动10分钟,以终止显色反应。摇动速度为60-70rpm。终止时有气体产生属正常现象,产生的气体为二氧化碳。
Silver Stain Stop Buffer (1X)的配制:90ml 纯水中加入10ml Silver Stain Stop Buffer (10X),混匀后即为Silver Stain Stop Buffer (1X)。Silver Stain Stop Buffer (1X)配制后宜当天使用。
11. 弃银染终止液,加入50ml 纯水,在摇床上室温摇动2-5分钟,摇动速度为60-70rpm。短期可在纯水中保存。或采用适当的方式制备成干胶长期保存。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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