供货周期: | 7天 |
品牌: | 博尔森 |
型号: | 50T/24S |
货号: | BES-2155BTK |
乙酰胆碱酯酶(AchE)活性检测试剂盒
可见分光光度法
规格:50T/24S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1.试剂二:临用前加入 5.2 mL 试剂一,充分震荡溶解;
2.试剂三:临用前加入 5.2 mL 试剂一,充分震荡溶解;
3.试剂四:临用前加入 5 mL 蒸馏水充分溶解,备用。
产品说明:
AchE 属于丝氨酸水解酶,广泛存在于各种动物组织和血清中。AchE 催化乙酰胆碱(Ach)水解,在神经传导调节中起重要作用。
AchE 催化 Ach 水解生成胆碱,胆碱与二硫对硝基苯甲酸(DTNB)作用生成 5-巯基-硝基苯甲酸(TNB);TNB在 412nm 处有吸收峰,通过测定 412nm 吸光度增加速率,计算 AchE 活性。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆,8000g 4℃离心 10min,取上清液待测。
2. 细菌、细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体:直接测定。
二、测定步骤
1. 可见分光光度计预热30min以上,调节波长至412nm,蒸馏水调零。
2. 样本测定:
三、AchE 酶活计算公式
1. 组织 AchE 活性
(1) 按照蛋白浓度计算
活性单位定义:每毫克蛋白每分钟催化产生 1nmol TNB 为 1 个酶活单位。
AchE 酶活(U/mg prot)=[ΔA÷ε÷d×V 显色×109] ÷(Cpr ×V 样×V 上清÷V 酶促)÷T=2255×ΔA ÷Cpr
(2) 按照样本质量计算
活性单位定义:每克组织每分钟催化产生 1nmol TNB 为 1 个酶活单位。
AchE 酶活(U/g 质量)=[ΔA÷ε÷d×V 显色×109]÷(W ×V 样÷V 样总×V 上清÷V 酶促)÷T =2255×ΔA÷W
2. 细菌、细胞 AchE 活性
活性单位定义:每 104 个细胞每分钟催化产生 1nmol TNB 为 1 个酶活单位。
AchE 酶活(U/104 cell)=[ΔA÷ε÷d×V 显色×109]÷(细胞数量×V 样÷V 样总×V 上清÷V 酶促)÷T
=2255×ΔA÷细胞数量
3. 血清 AchE 活性
活性单位定义:每毫升血清每分钟催化产生 1nmol TNB 为 1 个酶活单位。
AchE 酶活(U/mL)=[ΔA÷ε÷d×V 显色×109]÷(V 样×V 上清÷V 酶促)÷T =2255×ΔA
ε:TNB 摩尔消光系数,13.6×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 显色:显色反应体系总体积,1mL=0.001L;109:单位换算系数,1mol=1×109nmol;V 酶促:酶促反应总体积,0.23mL;V 上清:吸取上清液体积,0.05mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;V 样:加入样本体积,0.03mL;T:反应时间,5min;细胞数量:提取时的细胞数量,万个。
注意事项:
1.测定过程中样本和工作液在冰上放置,以免变性和失活。
2.当吸光值大于 1 时,建议将样本稀释后测定。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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