组织及血液碱性磷酸酶(AKP/ALP)活性检测试剂盒 可见分光光度法

组织及血液碱性磷酸酶（AKP/ALP）活性检测试剂盒说明书

 可见分光光度法

规格：50T/24S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

产品说明：

AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶，在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP广泛分布于人体各脏器中，以肝脏为主。

在碱性环境中，AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应红色亚醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通过测定510nm吸光度增加速率，来计算AKP活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

称取约 0.1g 组织，加提取液 1mL 充分研磨，4℃，10000rpm 离心 10min，取上清液待测。

血液可直接用于测定，或者适当稀释后用于测定。

二、操作步骤

1、 可见分光光度计预热30min以上，调节波长到510nm，蒸馏水调零。

2、 操作表

三、AKP/ALP活性计算

1、按样本蛋白浓度计算

活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol酚为一个酶活力单位。

AKP/ALP 酶活(U/mg prot) =[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样]÷(Cpr×V样)÷T

 =0.167×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr

2、按样本质量计算

活性单位定义：37℃中每克组织每分钟催化产生1μmol酚为一个酶活力单位。

AKP/ALP 酶活(U/g 质量) =[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样]÷(W÷V提取×V样)÷T

=0.167×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W

3、按血液体积计算

活性单位定义：37℃中每毫升血液每分钟催化产生1μmol酚为一个酶活力单位。

AKP/ALP 酶活(U/mL)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样]÷V样÷T

 =0.167×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)

C标准品：标准品浓度，2.5μmol/mL；V样：加入反应体系中上清液体积，0.02mL；T：反应时间，15min；V

提取：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL。

注意事项：

1、 试剂一、试剂二和试剂三均需避光保存。

2、 试剂三变蓝绿色后不能再使用。

3、 加入试剂三后必须立即混匀，否则显色不完全。

实验实例：

1、 取 0.1g 小鼠胰腺加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，测得计算 A 测定管=0.324、A

对照管=0.037、A 空白管=0.022、A 标准管=0.677，按样本质量计算酶活：AKP/ALP 酶活（U/g 质量）=0.167×(A

测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W=0.167×（0.324-0.037）÷（0.677-0.022）÷0.1=0.732 U/g 质量。

2、 取兔血清后直接按照测定步骤操作，测得计算 A 测定管=0.190、A 对照管=0.015、A 空白管=0.022、A 标准管

=0.677，按血液体积计算酶活：AKP/ALP 酶活（U/mL）=0.167×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)

=0.167×（0.190-0.015）÷（0.677-0.022）=0.0446 U/mL。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！