供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 50T/24S |
货号: | BES-2161BTK |
CAS号: |
组织及血液碱性磷酸酶(AKP/ALP)活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
规格:50T/24S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
产品说明:
AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶,在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP广泛分布于人体各脏器中,以肝脏为主。
在碱性环境中,AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚;酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应红色亚醌衍生物,在510nm有特征光吸收;通过测定510nm吸光度增加速率,来计算AKP活性。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
称取约 0.1g 组织,加提取液 1mL 充分研磨,4℃,10000rpm 离心 10min,取上清液待测。
血液可直接用于测定,或者适当稀释后用于测定。
二、操作步骤
1、 可见分光光度计预热30min以上,调节波长到510nm,蒸馏水调零。
2、 操作表
三、AKP/ALP活性计算
1、按样本蛋白浓度计算
活性单位定义:37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol酚为一个酶活力单位。
AKP/ALP 酶活(U/mg prot) =[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样]÷(Cpr×V样)÷T
=0.167×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
2、按样本质量计算
活性单位定义:37℃中每克组织每分钟催化产生1μmol酚为一个酶活力单位。
AKP/ALP 酶活(U/g 质量) =[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样]÷(W÷V提取×V样)÷T
=0.167×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W
3、按血液体积计算
活性单位定义:37℃中每毫升血液每分钟催化产生1μmol酚为一个酶活力单位。
AKP/ALP 酶活(U/mL)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样]÷V样÷T
=0.167×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
C标准品:标准品浓度,2.5μmol/mL;V样:加入反应体系中上清液体积,0.02mL;T:反应时间,15min;V
提取:加入提取液体积,1mL;W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL。
注意事项:
1、 试剂一、试剂二和试剂三均需避光保存。
2、 试剂三变蓝绿色后不能再使用。
3、 加入试剂三后必须立即混匀,否则显色不完全。
实验实例:
1、 取 0.1g 小鼠胰腺加入 1mL 提取液进行匀浆研磨,取上清后按照测定步骤操作,测得计算 A 测定管=0.324、A
对照管=0.037、A 空白管=0.022、A 标准管=0.677,按样本质量计算酶活:AKP/ALP 酶活(U/g 质量)=0.167×(A
测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W=0.167×(0.324-0.037)÷(0.677-0.022)÷0.1=0.732 U/g 质量。
2、 取兔血清后直接按照测定步骤操作,测得计算 A 测定管=0.190、A 对照管=0.015、A 空白管=0.022、A 标准管
=0.677,按血液体积计算酶活:AKP/ALP 酶活(U/mL)=0.167×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)
=0.167×(0.190-0.015)÷(0.677-0.022)=0.0446 U/mL。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
相关产品
GelstainRedTM 核酸染料, 10,000× in water
Super GelBlueTM 核酸染料, 10,000× in water
彩色预染蛋白Marker(10-250kDa, 双色)
琼脂糖 A2015
Super ECL Plus(超敏化学发光检测试剂盒)
PAGE 彩色快速凝胶制备试剂盒(10%)
Minerva Super Fusion Cloning Kit(无缝克隆试剂盒)
Cell Counting Kit-8(CCK-8)细胞增殖检测试剂盒
彩色预染蛋白Marker(10-180 kDa,三色)
FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒
二安替比林甲烷
焦硫酸钾
偶氮甲碱H
硫酸钾
阿拉伯胶
关注
拨打电话
留言咨询