供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 50T/48S |
货号: | BES-2165BTK |
CAS号: |
丙酮酸(PA)含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
规格:50T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,
超声3s,间隔10s,重复30次),静置30min,8000g,常温离心10min,取上清待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆,静置30min,8000g,常温离心10min,取上清待测。
3、血清(浆)样本:按照血清(浆)体积(mL):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议取0.1mL血清(浆)加入1mL 提取液),进行冰浴匀浆,静置30min,8000g,常温离心10min,取上清待测。
二、测定步骤
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至520nm,蒸馏水调零。
2、标准品的准备:将标准品用蒸馏水稀释至25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0.78125、0.39、0μg/mL。
3、取300μL标准品或样本+100μL试剂一于1.5mL EP管中,混匀,静置2min,加入500μL试剂二,混匀,于520nm波长处测定吸光值A。
三、丙酮酸含量计算
1、根据标准品浓度和测定值建立标准曲线;x为丙酮酸钠含量(μg/mL),y为吸光值。
2、按照血清(浆)体积计算
丙酮酸含量(μg/mL)= (x×V1)÷[V1÷(V2+V3)×V3]=11x
3、按照样本蛋白浓度计算
丙酮酸含量(μg/mg prot)=(x×V1)÷(V1×Cpr)=x÷Cpr
4、按照样本质量计算
丙酮酸含量(μg/g 质量)=(x×V1)÷(W×V1÷V2)=x÷W
5、按照细菌或细胞数量计算
丙酮酸含量(μg/104 cell)=(x×V1)÷(500×V1÷V2)=x÷500
V1:加入反应体系中样本体积,0.3mL;V2:加入提取液体积,1mL;V3:加入血清(浆)体积,0.1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。
注意事项:
如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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