供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 50T/48S |
货号: | BES-2187BTK |
CAS号: |
葡萄糖含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
规格:50T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
产品说明: 葡萄糖不仅是细胞能量代谢的主要底物,而且其代谢中间产物是生物合成的重要底物。植物可通过光合作用 产生葡萄糖。就哺乳动物而言,葡萄糖不仅是大脑神经系统、肌肉、脂肪组织等的唯一能源,而且与还原性辅酶、 乳糖和乳脂的合成密切相关。
葡萄糖氧化酶(Glucose Oxidase,GOD)催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并产生过氧化氢;过氧化物酶(Peroxidase, POD)催化过氧化氢氧化 4-氨基安替比林偶联酚,生成有色化合物,在 505 nm 有特征吸收峰。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅/恒温培养箱、台式离心机、超声破碎仪、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1. 组织的处理:按照组织质量(g):蒸馏水体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL蒸馏水),研磨成匀浆,置沸水浴中煮沸 10 min(盖紧,防止水分散失),冷却至室温后,8000g,25℃离心 10min,取上清液备用。
2. 细菌或细胞处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):蒸馏水体积(mL)为500~1000:1 的比例(建议500 万细菌或细胞加入1mL 蒸馏水),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率200W,超声3 s,间隔10 s,重复30次),置沸水浴中煮沸10min(盖紧,防止水分散失),冷却至室温后,8000g,25℃离心10min,取上清液备用。
涡旋混匀,置于 37℃(哺乳动物)水浴锅/恒温培养箱或 25℃(其它物种)水浴锅中保温 15min 后,于 505nm波长处读取吸光度 A,分别记为 A 空白、A 标准和 A 测定。计算 ΔA 测定=A 测定-A 空白,ΔA 标准=A 标准-A 空白。(空白管和标准管只需测 1-2 次)。
三、葡萄糖含量计算
1、按蛋白浓度计算
葡萄糖含量(μmol/mg prot)= C ×ΔA 测定÷ΔA 标准×V 样÷(Cpr×V 样)=ΔA 测定÷ΔA 标准÷Cpr
2、按样本质量计算
葡萄糖含量(μmol/g 质量)= C ×ΔA 测定÷ΔA 标准×V 样÷(W÷V 样总×V 样)= ΔA 测定÷ΔA 标准 ÷W
3、按细菌或细胞数量计算
葡萄糖含量(μmol/104 cell)= C ×ΔA 测定÷ΔA 标准×V 样÷(500÷V 样总×V 样)= 0.002×ΔA 测定÷ΔA 标准
C:葡萄糖溶液浓度,1μmol/mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;V 样:加入的样本体积,100μL=0.1mL;V
样总:样本总体积,1mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞数量,500 万。
注意事项:
如果样本吸光值大于1.3,建议将样本用蒸馏水稀释后进行测定。计算公式中注意乘以稀释倍数。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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