供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 50T/24S |
货号: | BES-2198BTK |
CAS号: |
β-木糖苷酶活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
规格:50T/24S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
产品说明:
β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体,是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶,产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外,β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业,比传统的漂白法环保,具有广泛的应用价值。
β-木糖苷酶催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚,对硝基苯酚在 405nm 处有特征吸收峰,测定 405nm光吸收增加速率,可计算 β-木糖苷酶活性。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
天平、低温离心机、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、水浴锅、蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1. 植物样本:称取约 0.1g 样本,加 1mL 提取液充分冰浴匀浆,然后 12000rpm,4℃,离心 20min,弃沉淀 ,取 20μL 上清测定蛋白含量,剩余上清作为待测酶液。
2. 细菌、真菌样本:收集约 500 万个细胞,加入 1mL 提取液,超声波破碎(冰浴,功率 300w,超声 3 秒,间隔 7秒,总时间 3min);然后 10000rpm,4℃,离心 10min,弃沉淀 ,取 20μL 上清测定蛋白含量,剩余上清置于冰上待测。
二、测定步骤
1、 可见分光光度计预热30min 以上,调节波长至405nm,蒸馏水调零。
2、 标准液的处理:用试剂二将标准液稀释至 0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625μmol/mL。
3、 样本测定:
三、β-木糖苷酶活性计算
根据标准管的吸光度ΔA标准(x)和浓度(y,μmol/mL)建立标准曲线,将ΔA测定带入标准曲线中,计算样本生成的产物量y(μmol/mL)。
1、按样本蛋白浓度计算
酶活定义:45℃,pH7.4 时,每毫克蛋白质 1min 内催化产生 1μmol 对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性(U/mg prot)=(y×V样)÷(V样×Cpr)÷T=0.05×y÷Cpr
2、按样本质量计算:
酶活定义:45℃,pH7.4 时,每克样本 1min 内催化产生 1μmol 对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性(U/g 质量)=(y×V样)÷(W×V样÷V样总)÷T=0.05×y ÷W
3. 按细胞数量计算:
酶活定义:45℃,pH7.4 时,每 104个细胞 1min 内催化产生 1μmol 对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性(U/104 cell)= (y×V样)÷(500×V样÷V样总)÷T=0.0001×y
Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;V样:加入反应体系中样本体积,0.2mL;V样总:加入提取液体积,1mL;W:
样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500万;T:反应时间,20min。
注意事项:
1、 吸光度变化应该控制在 0.05-0.6 之间。否则加大样本量或稀释样本,注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。
2、 样本蛋白质含量需要另外测定。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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