供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 50T/48S |
货号: | BES-2205BTK |
CAS号: |
总糖含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
规格:50T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
产品说明:
糖类物质是构成植物体的重要成分之一,也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。总糖主要指具有还原性的葡萄糖,果糖,戊糖,乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖,麦芽糖以及可能部分水解的淀粉。总糖酸水解为还原糖,还原糖在碱性条件下与DNS试剂共热后被还原成氨基化合物,在碱性溶液中呈红棕色,还原糖的量与桔红色物质颜色的深浅成正比关系,以此测定样本中的总糖含量。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、组织样本的处理:称取约 0.1g 样本于 10mLEP 管中,加入 1mL 试剂一,1.5mL 蒸馏水,研磨匀浆,沸水浴 30min,加入 1mL 试剂二,涡旋混匀,用蒸馏水定容至 10mL,8000g,25℃离心 10min,取上清液待测。(注意稀释,见注意事项)。
2、血清(浆)、液体样本的处理:取 0.1mL 血清(浆)于 1mLEP 管中,加入 0.1mL 试剂一,0.15mL 蒸馏水,匀浆,沸水浴 30min,加入 0.1mL 试剂二,涡旋混匀,用蒸馏水定容至 1mL,8000g,25℃离心 10min,取上清液待测。(注意稀释,见注意事项)。
二、测定步骤
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 540nm,蒸馏水调零。
三、总糖含量计算
1、标准曲线的绘制:
根据标准管的浓度(x,mg/mL)和吸光度ΔA标准(y,ΔA标准),建立标准曲线。根据标准曲线,将ΔA测定(y,ΔA测定)带入公式计算样本浓度(x,mg/mL)。
2、按样本质量计算:总糖(mg/g 质量)=(x×V 样总)÷W×稀释倍数=10×x÷W×稀释倍数
3、按血清(浆)、液体体积计算:总糖(mg/mL)=(x×V 提)÷V 样×稀释倍数=10×x×稀释倍数
V 样总:样本体积总体积,10mL;W:样本质量,g;V 提:液体或血清样本总体积,1mL;V 样:液体或血清体积,0.1mL。
注意事项:
1、此试剂盒对于纤维素的分解程度无法达到 100%。
2、如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。注意同步修改计算公式。
实验实例:
1、 取 0.1g 兔子肝脏进行样本处理,取上清,按照测定步骤操作,测得计算 ΔA 测定=A 测定管-A 空白管=0.965-0.019=0.946,标准曲线 y=1.2984x-0.0284,则 x=0.7505,按样本质量计算含量得:
总糖(mg/g 质量)=10×x÷W=75.05 mg/g 质量。
2、 取 0.1g 迎春进行样本处理,取上清,按照测定步骤操作,测得计算 ΔA 测定=A 测定管-A 空白管=0.961-0.019=0.942,标准曲线 y=1.2984x-0.0284,则 x=0.7474,按样本质量计算含量得:
总糖(mg/g 质量)=10×x÷W=74.74 mg/g 质量。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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