| 供货周期： | 一周 |
| 品牌： | 博尔森 |
| 规格： | 50T/48S |
| 货号： | BES-2240BTK |
| CAS号： |
糖原合成酶（GCS）活性检测试剂盒说明书
紫外分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
规格：50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制：
1、 试剂四：提供一个 5 mL 试剂瓶，用前取 1 支加入 3mL 试剂一充分溶解，-20℃分装保存 4 周，避免反复冻融；
2、 试剂五：提供一个 5 mL 试剂瓶，用前取 1 支加入 3mL 试剂一充分溶解，-20℃分装保存 4 周，避免反复冻融；
3、 工作液的配制：临用前将试剂三离心，取 20 μL 试剂三，加 14 mL 试剂一、3 mL 试剂四、3mL 试剂五，充分混合（约 26T），现用现配，也可根据样本量按比例配制；
4、 试剂八的配制：
（1） 临用前取 1 瓶试剂八中加入 6mL 试剂二充分溶解，再将 1 支试剂七转移到试剂八中混合溶解后待用，可-20℃分装保存 4 周，避免反复冻融；
（2） 用前先将试剂六离心，取 55 μL 试剂六加入 5.74 mL 上述（1）中溶液，充分混合（约 28T），现用现配，也可根据样本量按比例配制。
产品说明：
糖原合成酶（Glycogen synthase , GCS）将UDPG的糖基加到原有糖原或是糖原蛋白的非还原端，以α-1,4糖苷键连接。GCS是动物机体糖原合成过程的限速酶，同时也是胰岛素作用的主要靶酶，在糖代谢及维持血糖相对稳定的过程中有着重要作用。
GCS催化UDPG和葡萄糖残基生成糖原和UDP，丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH生成NAD+，在340 nm下测定NADH的下降速率，即可反映GCS活性。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、低温台式离心机、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、超声破碎仪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后，8000g，4℃离心 10min，取上清置于冰上待测。
细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细胞数量（104 个）:提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细菌或细胞（功率 200w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
血清等液体：直接检测。（若溶液浑浊则离心后取上清进行测定）
二、测定步骤
1、 紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、 临用前将工作液与试剂八置于37℃水浴锅中预热5min（工作液用多少预热多少）。
3、 操作表：在1mL石英比色皿中分别加入下列试剂：
三、GCS 酶活计算
注意事项：
1、 样本提取上清液置于冰上待测，提取样本建议当天测完。
2、 若ΔA大于0.2，建议将样本用提取液稀释适当倍数后测定，以提高检测灵敏度，并在计算公式中乘以相应的稀释倍数。
实验实例：
1、取0.1g小鼠心脏加入1mL提取液进行样本处理，取上清后按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定管=A1测定-A2测定=1.177-1.119=0.058，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.944-0.939=0.005，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管=0.058-0.005=0.053，按照样本质量计算酶活得：
GCS酶活（U/g 质量）=3215.4×ΔA÷W=1704.162 U/g 质量。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
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