供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 100T/96S |
货号: | BES-2251BTK |
CAS号: |
过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒说明书
微量法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
规格:100T/96S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂二:液体置于试剂瓶内 EP 管中,使用前需先离心。取 0.1 mL 试剂二加入 1.5 mL 试剂一混合备用(约53T),现配现用,也可根据样本量按比例配制。
产品说明:
POD(EC 1.11.1.7)广泛存在于动物、植物、微生物中,可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物,具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。POD 在有过氧化氢存在的情况下,能使愈创木酚发生氧化,生成茶褐色物质,该物质在 470nm 有最 大光吸收。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、细菌、细胞或组织样本的制备
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样本:直接检测。
二、测定步骤
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 470nm,蒸馏水调零。
2、 测定前将试剂一、二和三在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)放置 10min 以上。
3、 样本测定表
在 EP 管中按顺序加入上述试剂,立即混匀并计时,立即取 200μL 转移至微量玻璃比色皿或 96 孔板中,记录470nm 下 30s 时的吸光值 A1 和 1min30s 后的吸光值 A2。计算 ΔA=A2-A1。
三、POD 活性计算
注意事项:
1、 如一次测定的样本数量较多,可将试剂一、二、三和蒸馏水按照比例混合,在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)放置 10min,测定时加入 240μL 即可。
2、 样本测定值如果小于 0.005,可将反应时间延长到 3-5 分钟,计算时除以反应时间即可;如果高于 0.5 或者反应液中有较多气泡产生,可将样本用提取液进行稀释。计算时乘以相应的稀释倍数即可。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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