土壤碱性磷酸酶(S-AKP/ALP)活性检测试剂盒 微量法

参考价:¥560
供货周期: 一周
品牌: 博尔森
规格: 100T/96S
货号: BES-2268BTK
CAS号:
上海博尔森生物科技有限公司
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产品详情

土壤碱性磷酸酶(S-AKP/ALP)活性检测试剂盒说明书

微量法

注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。

规格:100T/96S

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

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溶液的配制:

1.试剂二:临用前加 100 mL 蒸馏水充分溶解,2-8℃保存 8 周;

2.试剂四:临用前取 1 支加 576 μL 无水乙醇(自备),24 μL 蒸馏水充分溶解。用不完的试剂 2-8℃保存一周(变褐色后不能再使用,一瓶即可以实验 100T,为延长反应时间故多给一瓶);

3.标准品:0.5 μmol/mL 苯酚标准液。

产品说明:

土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶,其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性,是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH 显著影响,根据最适 pH 范围,通常分为酸性、中性和碱性三种类型。

碱性环境中,S-AKP/ALP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠,通过测定酚的生成量即可计算出SAKP/ALP活性。

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注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、研钵、蒸馏水、30-50 目筛、乙醇和甲苯(不允许快递)。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1. 新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干,过 30~50 目筛。

2. 称取风干混匀土壤约 0.1g,加入 0.05mL 甲苯(自备),轻摇 15min;加 0.4mL 试剂一并且摇匀后,置于 37℃

水浴锅/恒温培养箱,开始计时,催化反应 24h;到时后迅速加入 1mL 试剂二充分混匀,以终止酶催化的反应。10000rpm 室温离心 10min,取上清液置于冰上待测。

二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长到 660nm,分光光度计蒸馏水调零。

2. 空白管:取微量比色皿/96 孔板,加入 10μL 试剂一,20μL 试剂三,4μL 试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水 166μL,混匀后室温静置 30min,于 660nm 测定吸光度,记为 A 空白管。(空白管只需要测定 1-2 次)

3. 标准管:取微量比色皿/96 孔板,加入 10μL 标准液,20μL 试剂三,4μL 试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水 166μL,混匀后室温静置 30min,于 660nm 测定吸光度,记为 A 标准管。(标准管只需要测定 1-2 次)

4. 测定管:取微量比色皿/96 孔板,加入 10μL 上清液,20μL 试剂三,4μL 试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水 166μL,混匀后室温静置 30min,于 660nm 测定吸光度,记为 A 测定管。

三、S-AKP/ALP 活性计算

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特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!

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