供货周期: | 7天 |
品牌: | 博尔森 |
型号: | 100T/96S |
货号: | BES-2314BTK |
琥珀酸脱氢酶(SDH)活性检测试剂盒说明书
微量法
规格:100T/96S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂四:临用前加入到试剂三中溶解待用;
2、 试剂五:临用前加入 4 mL 双蒸水,用不完的试剂仍 4℃保存;
3、 试剂六:临用前加入 3.333 mL 双蒸水,用不完的试剂 4℃保存。
产品说明:
SDH(EC 1.3.5.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。SDH是线粒体的一种标志酶,位于线粒体内膜上的一种膜结合酶,是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。此外,为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。
SDH催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸,脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸(PMS)传递还原2,6-二氯酚靛酚(DCPIP),并且在600nm处具有特征吸收峰,通过600nm吸光度的变化,测定2,6-DCPIP的还原速度,代表SDH酶活性。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
准确称取 0.1g 组织或收集 500 万细胞,加入 1mL 试剂一和 10μL 试剂二,用冰浴匀浆器或研钵匀浆充分研磨,4℃11000g 离心 10min,取上清,置冰上待测。
二、测定步骤
1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至600nm,蒸馏水调零。
2、 样本测定
在加入试剂六的同时开始计时,在 600nm 波长下记录 20 秒时的初始吸光度 A1 和 1 分 20 秒时的吸光度 A2,计算 ΔA=A1-A2,得到 ΔA 测定、ΔA 空白。
三、SDH 活性的计算
注意事项:
1、 测定过程中所有试剂和样本在冰上放置,以免变性失活。
2、 若ΔA大于0.5(比色皿)/0.3(96孔板),需将酶液用酶提取液稀释,使ΔA小于0.5/0.3,可提高检测灵敏度。
3、 由于提取液中含有一定浓度的蛋白(约1mg/mL),所以在测定样品蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。
实验实例:
1、 取 0.1g 肾脏加入 1mL 试剂一和 10μL 试剂二,用冰浴匀浆器匀浆充分研磨,4℃11000g 离心 10min,取上清置冰上。按照测定步骤操作,用微量石英比色皿测得计算 ΔA 测定=A1 测定-A2 测定=0.7838-0.6414=0.1424,ΔA空白=A1 空白-A2 空白=1.019-1.019=0,按样本质量计算酶活得:
SDH 活性(U/g 质量)=961.905×(ΔA 测定-ΔA 空白)÷W=1369.75 U/g 质量。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
GelstainRedTM 核酸染料, 10,000× in water
Super GelBlueTM 核酸染料, 10,000× in water
彩色预染蛋白Marker(10-250kDa, 双色)
琼脂糖 A2015
Super ECL Plus(超敏化学发光检测试剂盒)
PAGE 彩色快速凝胶制备试剂盒(10%)
Minerva Super Fusion Cloning Kit(无缝克隆试剂盒)
Cell Counting Kit-8(CCK-8)细胞增殖检测试剂盒
彩色预染蛋白Marker(10-180 kDa,三色)
FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒
二安替比林甲烷
焦硫酸钾
偶氮甲碱H
硫酸钾
阿拉伯胶
关注
拨打电话
留言咨询