供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 100T/48S |
货号: | BES-2368BTK |
CAS号: |
谷丙转氨酶(GPT/ALT)活性检测试剂盒说明书
微量法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂一:提供 1 个 8 mL 棕瓶;临用前取 1 支试剂一倒入空瓶中,用 2 mL 蒸馏水溶解,再用溶液将试剂一残留试剂润洗下来;
2、 标准液:20 μmol/mL 丙酮酸钠。
产品说明:
谷丙转氨酶又叫丙氨酸氨基转移酶(EC 2.6.1.2),GPT(EC 2.6.1.2)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化氨基酸和酮酸转氨基反应,在氨基酸代谢中具有重要作用。此外,哺乳动物肝细胞GPT活性很高,当肝细胞坏死,GPT释放到血液中,血清GPT活性显著增高。因此,GPT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。
GPT催化丙氨酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应,生成丙酮酸和谷氨酸;加入2,4-二硝基苯肼溶液,不仅终止上述反应,而且与酮酸中的羰基加成,生成丙酮酸苯腙;苯腙在碱性条件下呈红棕色,可以在505nm读取吸光值并计算酶活力。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、细胞或细菌的制备:先收集细胞或细菌样本到离心管内,弃上清,按照每 500 万细胞或细菌加入 1mL 提取液,超声波破碎细胞或细菌(功率 20%,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次)。3500g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。3500g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样本:直接检测。
二、测定步骤
1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至505nm,蒸馏水调零。
2、标准曲线的稀释:首先将标准品用蒸馏水稀释至2μmol/mL,按下表混合标准品和试剂一得到浓度梯度标准管:
3、在EP管或在96孔板中加入下列试剂
三、GPT 活性计算
实验实例:
1、 取 0.1g 兔子肝脏组织加入 1mL 提取液进行匀浆研磨,取上清后再按照测定步骤操作,用 96 孔板测得 A 测定管=0.701,A 对照管=0.271,计算?A=A 测定管-A 对照管=0.701-0.271=0.430,带入标准曲线 y=0.2796x+0.0476,计算 x=(0.430-0.0476)÷0.2796=1.368,按样本质量计算酶活得:
GPT(U/g 质量)=12x÷W=12×1.368÷0.1=164.16 U/g 质量。
2、 取兔血清直接检测,使用 96 孔板测得 A 测定管=0.307,A 对照管=0.247,计算?A=A 测定管-A 对照管=0.307-0.247=0.06,带入标准曲线 y=0.2796x+0.0476,计算 x=(0.06-0.0476)÷0.2796=0.044,按血清(浆)体积计算酶活得:
GPT(U/mL)=12x=12×0.044=0.528 U/mL。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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