供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 100T/48S |
货号: | BES-2369BTK |
CAS号: |
谷草转氨酶(GOT/AST)活性检测试剂盒说明书
微量法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂一:提供 1 个 8 mL 空瓶;临用前取 1 支试剂一倒入空瓶中,用 2 mL 蒸馏水溶解,再用溶液将试剂一残留的试剂润洗下来,现用现配;
2、 标准品:20 μmol/mL 丙酮酸钠。
产品说明:
谷草转氨酶又叫天门冬氨酸氨基转移酶( 2.6.1.1),广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化可逆转氨基反应,是氨基酸代谢的重要酶。此外,GOT在心肌细胞中含量最 高,临床上一般常作为心肌梗塞和心肌炎的辅助检查。肝脏损害时其血清浓度也可升高。
GOT催化α-酮戊二酸和天门冬氨酸发生转氨基反应,生成谷氨酸和草酰乙酸,草酰乙酸进一步自行脱羧生成丙酮酸;丙酮酸可与2,4-二硝基苯肼反应生成2,4-二硝基苯腙,在碱性条件下显棕红色;测定505nm吸光度的变化,即可计算GOT酶活力。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、细胞或细菌样本的制备:先收集细胞或细菌样本到离心管内,弃上清,按照每 500 万细胞或细菌加入 1mL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率 20%,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次)。3500g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。3500g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样本:直接检测。
二、测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至505nm,蒸馏水调零。
2、标准曲线的测定:首先将标准品用蒸馏水稀释至2μmol/mL,按下表混合标准品和试剂一得到相应浓度的标准管
3、在 EP 管或在 96 孔板中加入下列试剂
注:0μmol/mL 标准管为空白管。
三、GOT 活性计算
实验实例:
1. 取 0.1g 兔子肝脏组织加入 1mL 提取液进行匀浆研磨,取上清后再按照测定步骤操作,用 96 孔板测得 A 测定管=0.451,A 对照管=0.281,标准曲线 y=0.2817x+0.0211,计算?A=A 测定管-A 对照管=0.451-0.281=0.170,x=(0.170-0.0211)÷0.2817=0.53,按样本质量计算酶活得:
GOT(U/g 质量)=12x÷W=12×0.53÷0.1=63.6 U/g 质量。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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