供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 100T/48S |
货号: | BES-2388BTK |
CAS号: |
维生素 B6(VB6)检测试剂盒说明书
微量法
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 提取液:内含不溶物,使用前摇匀;
2、 试剂四:临用前加入 10 mL 蒸馏水混匀,4℃保存一周,如果一次性用不完,可分装于-20℃保存待用;
3、 标准品:10mg 维生素 B6,临用前加入 1 mL 试剂一,配成 10 mg/mL 的标准液。
产品说明:
维生素 B6(Vitamin B6)又称吡哆素,其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺,在体内以磷酸酯的形式存在,是一种水溶性维生素,肉类、全谷类、蔬菜和坚果类中含量较高。在机体中参与多种蛋白质和氨基酸的代谢,对生物体具有极其重要的作用。
VB6 与 4-氨基安替比林在强氧化剂作用下生成稳定的黄色化合物,在 400nm 有特征吸收峰。
技术指标:
最 低检出限:0.0179 mg/mL
线性范围:0.03125-1 mg/mL
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
组织:将样本磨碎,按照质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g,加入 0.6mL 提取液)加入提取液,60℃浸提 30min,加蒸馏水 0.4mL,混匀后于 25℃,16000rpm 离心 10min,取上清测定(动物组织及其他蛋白含量较高的样本建议离心 20-30 分钟或反复离心 2-3 次至上清无混浊)。
细胞或细菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 0.6mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);加蒸馏水 0.4mL,混匀后于 25℃,16000rpm 离心 10min,取上清测定。
液体:直接检测。
二、测定步骤
1. 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 400nm,蒸馏水调零。
2. 将 10mg/mL 标准液用试剂一稀释为 1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625mg/mL 的标准溶液备用。
3. 操作表:在 1.5mL 离心管或 96 孔板中依次加入下列试剂
三、维生素 B6 含量计算
注意事项:
1、 如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
2、 蛋白浓度较高的样本,比如动物组织、豆类种子等,若显色完成后有沉淀产生,将样本稀释后再测定,在计算公式中乘以稀释倍数。
3、 显色完成后立即进行测定,尽量保证反应时间一致。
实验实例:
1、 称取 0.1g 小鼠肌肉组织,加入 0.6mL 提取液,60℃浸提 30min,加蒸馏水 0.4mL,混匀后于 25℃,16000rpm离心 10min,取上清,之后按照测定步骤操作,使用 96 孔板测得计算 ΔA=A 测定管-A 对照管=0.129-0.087=0.042,标准曲线 y=0.834x-0.0104,计算 x=0.0628,按样本质量计算 VB6 含量得:
VB6(mg/g 质量)=x×V 提取÷W= 0.0628×1 ÷0.1=0.628 mg/g 质量。
2、 称取 0.1g 花生,加入 0.6mL 提取液,60℃浸提 30min,加蒸馏水 0.4mL,混匀后于 25℃,16000rpm 离心 10min,取上清,之后按照测定步骤操作,使用 96 孔板测得计算 ΔA=A 测定管-A 对照管=0.256-0.159=0.097,标准曲线 y=0.834x-0.0104,计算 x=0.129,按样本质量计算 VB6 含量得:
VB6(mg/g 质量)=x×V 提取÷W=0.129×1÷0.1=1.29 mg/g 质量。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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