供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 100T/48S |
货号: | BES-2421BTK |
CAS号: |
中性木聚糖酶(NEX)活性检测试剂盒说明书
微量法
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
标准品:10mg木糖。临用前加入667μL蒸馏水配成100μmol/mL的标准品溶液,再用水稀释25倍得到4μmol/mL的木糖标准液,备用。
产品说明:
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生,能催化水解木聚糖,也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶,可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及 β-葡聚糖,降低酿造中物料的粘度,促进有效物质的释放,以及降低饲料中的非淀粉多糖,促进营养物质的吸收利用,因而广泛的应用于酿造和饲料工业中,中性木聚糖酶(NEX)一般分离自最适生长 pH 为 6-8 的微生物。
NEX 在中性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖,在沸水浴条件下进一步与 3,5-二硝基水杨酸发生显色反应,在 540nm 处有特征吸收峰,反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比,通过测定反应液在 540nm吸光值增加速率,可计算 NEX 活力。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、细胞或微生物样本发酵液的制备:发酵液于 8000rpm,4℃,离心 15min,取上清,置于冰上待测。
2、组织:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 缓冲液,冰上充分研磨。8000g,4℃离心 15min,取上清,置冰上待测。
3、酶干粉:称约 1mg,加缓冲液 1mL,震荡充分溶解。
二、测定步骤
1、 可见分光光度计/酶标仪预热30min 以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。
2、 将上清液/酶溶液用蒸馏水稀释十倍后置冰上待测。
3、 样本测定:
三、NEX计算公式
注意事项:
吸光度变化应该控制在 0.01~1.5 之间,否则加大样本量或稀释样本,注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变;也可以延长或者缩短反应时间。
实验实例:
1、 取 0.1g 柳树叶加入 1mL 缓冲液进行匀浆研磨,取上清用蒸馏水稀释十倍后按照测定步骤操作,用 96 孔板测得计算 ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.592-0.408=0.184,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管=1.009-0.173=0.836,按样本质量计算酶活得:
NEX 活力(U/g 质量)=1.33×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W=1.33×0.184÷0.836÷0.1=2.927 U/g 质量。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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