| 供货周期： | 一周 |
| 品牌： | 博尔森 |
| 规格： | 100T/48S |
| 货号： | BES-2425BTK |
| CAS号： |
果胶酶活性检测试剂盒说明书
微量法
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制：
1、试剂一：若溶液中有不溶解物质，可以 50℃水浴溶解。
2、标准品：10mg 半乳糖醛酸。临用前加入 0.943mL 蒸馏水，配成 50μmol/mL 的标准液。
产品说明：
果胶酶（pectinase）是分解果胶的酶类，包括原果胶酶，果胶酯酶，多聚半乳糖醛酸酶和果胶裂解酶四大类，广泛存在于高等植物果实和微生物中，是水果加工中最重要的酶。
果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸，半乳糖醛酸与 DNS 试剂反应生成在 540nm 有特征吸收峰的棕红色物质，测定 540nm 处吸光值变化可计算得果胶酶活性。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
2、菌类：按照细菌数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌加入 1mL提取液），冰浴超声波破碎细菌（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
3、液体：直接检测。
二、测定步骤
1、 可见分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2、 将 50μmol/mL 标准液用蒸馏水稀释为 10、8、6、4、2、1 μmol/mL 的标准溶液备用。
3、 取 40μL 样本沸水浴 10min 备用。
4、 样本测定（在1.5mL离心管中）：
三、果胶酶活性计算
注意事项：
1、 A 大于 1.5 时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定。
2、 植物果实组织建议将样本用提取液稀释 10 倍或 20 倍后再测定。
实验实例：
1、 取 0.1g 苹果加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清稀释 10 倍之后按照测定步骤操作，用 96 孔板测得计算 ΔA= A 测定管-A 对照管=1.466-1.357=0.109，带入标准曲线 y=0.1428x-0.1022，计算 X=1.479μmol/mL，按样本质量计算酶活得：
果胶酶活性（U/g 质量）=2x÷W×10（稀释倍数）=295.8 U/g 质量。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
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