供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 50T/24S |
货号: | BES-2542BTK |
CAS号: |
细胞壁结合酸性转化酶(CWI)活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
规格:50T/24S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂二:临用前加入 25 mL 试剂一,充分溶解后待用;
2、 标准品:10 mg 无水葡萄糖。临用前加入 1 mL 蒸馏水充分溶解,配成 10 mg/mL 葡萄糖溶液备用,4℃保存一周。
产品说明:
蔗糖转化酶(Invertase,Inv)不可逆的催化蔗糖裂解形成葡萄糖和果糖,在植物蔗糖代谢中发挥着重要作用。Inv根据最适 pH,可分为酸性转化酶(AI)和中性转化酶(NI),其中 AI 根据亚细胞定位的差异又可分为可溶性酸性转化酶(Soluble acid Invertase,SAI)和细胞壁结合酸性转化酶(Cell wall-bound acid Invertase,CWI)。
CWI 以离子键的形式结合在细胞壁上,在“库”组织韧皮部蔗糖卸载、蔗糖质外运输、植物的生长发育以及抵抗各种胁迫中起着重要作用。
CWI 催化蔗糖降解产生还原糖,还原糖与 3,5 –二硝基水杨酸反应生成在 540nm 有特征吸收峰的棕红色物质,通过测定 540nm 处吸光值变化可计算得 CWI 活性。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式低温离心机、水浴锅、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
组织:按照质量(g): 提取液一体积(mL)为 1 : 5~10 的比例(建议称取约 0.1g,加入 1mL 提取液一)加入提取液,冰浴匀浆后于 4℃,12000g,离心 10min,弃上清,留沉淀;沉淀中加入 1mL 蒸馏水,充分震荡混匀,4℃,12000g,离心 10min,弃上清,留沉淀;沉淀中加入 1mL 提取液二,充分混匀,4℃浸提 15 h,4℃,12000g,离心 10min,取上清置于冰上待测。
二、测定步骤
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 540nm,蒸馏水调零。
2、 将 10mg/mL 标准液用蒸馏水稀释为 1、0.8、0.6、0.5、0.4、0.3mg/mL 的标准溶液备用。
3、 操作表 (在 2mL 离心管中操作) :
三、CWI活性计算
注意事项:
1. 当 A 或 ΔA 超过 1 时,建议将样本用提取液二稀释后再进行测定,计算公式中乘以稀释倍数。
2. 95℃水浴时 EP 管盖紧,防止水分散失,待冷却至室温后(建议每次实验后冷却时间保持一致),再进行下一步操作,避免液体飞溅烫伤以及影响试验数据。
实验实例:
1. 取 0.1g 丁香叶加入 1mL 提取液进行匀浆研磨,最 后取上清后按照操作步骤操作,测 A 对照管=0.566,A 测定管=0.903,标准曲线 y=1.315x-0.2723,A 空白管=0.058,计算 ΔA=A 测定管-A 对照管=0.903-0.566=0.337,x=(0.337+0.2723)÷1.315=0.463,按样本质量计算酶活得:
CWI 酶活(U/g 质量)= 33.33x÷W= 33.33×0.463÷0.1=154.433 U/g 质量。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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