供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 100T/48S |
货号: | BES-2547BTK |
CAS号: |
N-乙酰-β-D -葡萄糖苷酶(NAG)活性检测试剂盒说明书
微量法
规格: 100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂二:临用前加入 2 mL 蒸馏水溶解备用;可-20℃分装保存,避免反复冻融,-20℃可保存 2 周;
2、 标准品:5 μmol/mL 对硝基苯酚溶液。临用前用蒸馏水将标准品稀释 8 倍得 0.625 μmol/mL 的标准溶液。
产品说明:
N-乙酰-β-D -葡萄糖苷酶(EC 3.2.1.52,N-acetyl-β-D-glucosidase,NAG)广泛分布于各种组织中,是一种细胞内溶体酶,测定NAG活性可用于肾小管间质性肾炎、尿路感染、糖尿病肾病综合症、高血压肾病、肾移植后的排异反应和肾病综合症的早期诊断。
NAG分解N-β-乙酰氨基葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者在400nm有最 大吸收峰,通过测定400nm下吸光度的变化来计算NAG活性。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆。15000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。
2、细菌、细胞:按照细胞数量 104个:提取液体积(ml)500~1000:1 的比例,建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(率 300w,超声 3 s,间隔 7s,总时间 3min)然后 15000g,4℃,离心 10min,取上清置冰上待测。
3、血清(浆)等液体:直接测定。
二、测定步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至400nm,蒸馏水调零。
2、 操作表 (在1.5mL离心管中依次加入下列试剂) :
三、NAG活性计算
注意事项:
吸光度若大于2时,建议将样本用提取液稀释后进行测定。
实验实例:
1. 称取 0.1g 大鼠脾脏组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。15000g,4℃离心 10min,取上清稀释 5 倍,按照测定步骤操作,使用 96 孔板测定计算 ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.582-0.067=0.515,ΔA 标准=A 标准管A 空白管=0.268-0.047=0.221,按样本质量计算得:
NAG(U/g 质量)=20.83×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W×5(稀释倍数)=2427.02 U/g 质量。
2. 取 0.1g 玉兰,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。15000g,4℃离心 10min,取上清,按照测定步骤操作,使用 96孔板测定计算ΔA测定=A测定管-A对照管=0.405-0.112=0.293,ΔA标准=A标准管-A空白管=0.268-0.047=0.221,按样本质量计算得:
NAG(U/g 质量)=20.83×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W=276.162 U/g 质量。
3. 取兔血清直接检测,按照测定步骤操作,使用96孔板测定计算ΔA测定=A测定管-A对照管=0.368-0.246=0.122,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管=0.268-0.047=0.221,按液体体积计算得:
NAG(U/mL)=20.83×ΔA 测定÷ΔA 标准=11.4989 U/mL。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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