供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 100T/96S |
货号: | BES-2559BTK |
CAS号: |
草酸含量检测试剂盒说明书
微量法
规格:100T/96S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂一:临用前加入 3mL 蒸馏水溶解后待用;
2、 标准品:临用前加入 792μL 蒸馏水配制成 100 μmol/mL 草酸标准溶液;
产品说明:
草酸是一种二元羧酸,广泛存在于植物界中,且在不同领域有着不同的作用:在医药、印染、塑料等工业生产中,草酸可用作制药原料、络合剂、漂白剂、沉淀剂以及还原剂等;从食品角度看,长期食用草酸含量高的蔬菜,容易引发关节炎、低血钙、膀胱结石和肾结石等疾病,而被认为是矿物元素的拮抗物。
Fe3+在 pH 为 2 的条件下可以与磺基水杨酸生成紫色络合物,在 510 nm 处有特征吸收峰。草酸及草酸根可以使 Fe3+与磺基水杨酸的紫色络合物颜色变浅,且Fe3+与磺基水杨酸络合物的吸光度随着草酸量的增加而降低,据此可由降低的吸光值计算出样本中草酸的含量。
技术指标:
最 低检出限:0.1601 μmol/mL
线性范围:0.1875-18 μmol/mL
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP管。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
组织:按照质量(g):蒸馏水体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1 g,加入 1 mL 蒸馏水)充分匀浆,然后加入少许试剂四(约 3-5mg),震荡混匀后置于 75℃水浴锅脱色 30 min,期间摇晃 2-3 次,脱色后常温 3000r/min离心 15 min,取上清置于冰上待测(若组织沉淀与试剂四不能一次性离心去除时,建议将上清多离心几次;若一次脱色不完全时,建议重复脱色至溶液呈无色或略呈乳白色)。
二、测定步驟
1、 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上,调节波长至 510 nm,蒸馏水调零。
2、 将 100 μmol/mL 的草酸标准液用蒸馏水稀释为 18、15、12、6、3、1.5、0.75、0.375 μmol/mL 的标准溶液备用。
3、 操作表 (在 1.5 mL 离心管/96 孔板中操作) :
注意:如果检测样本量大,可以根据样本所需按照试剂一:试剂二:试剂三=2:15:1(v:v:v)的比例配制成工作 液现配现用,加样体系为 180 μL 工作液,20 μL 样本(蒸馏水或标准溶液)。
三、草酸含量计算
1、 标准曲线的绘制: 以各个标准溶液的浓度为 x 轴,其对应的 ΔA 标准为 y 轴,绘制标准曲线,得到标准方程 y= kx+b,将 ΔA 带 入方程得到 x(μmol/mL)。
2、 草酸含量的计算: 草酸含量(mg/g 质量)= x×V 提取×M×10-3÷W=0.09x÷W V 提取:加入的蒸馏水体积,1mL;W:样本质量,g;M:草酸分子质量 90.04;10-3:单位换算系数,1 μg=10-3 mg。
注意事项:
1. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
2. 如将试剂一、试剂二与试剂三配成工作液使用时,按照配制比例根据样本量所需现配现用,不得一次性配完待用。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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