供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 5次 |
货号: | BES232085ME |
CAS号: |
蛋白胶中量回收试剂盒
产品及特点 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)不仅可用于检测蛋 白质的相对分子质量,而且也是分离纯化蛋白质的重要工具之一,随着蛋白 质技术的微量化,有必要从凝胶中回收蛋白质以用于制备抗体、免疫印迹、 氨基酸组分分析或末端序列测定等。本产品就是专门为此用途开发的中量蛋 白胶回收法,它具有下列特点:
1. 简单,不需要复杂而昂贵的仪器(如电洗脱仪)。 2. 适用于变性胶(SDS-PAGE)和非变性胶。
3. 每次可以处理 1 g 的 PAGE 胶(具体多少蛋白质取决于上样的浓度)。
4. 回收率一般在 50-90%之间(跟蛋白质大小,洗脱时间相关)。
5. 跟后续的实验兼容,包括 2-D 电泳、质谱测序等。
规格及成分
运输及保存 常温运输和保存,有效期一年。
自备试剂 无
使用方法
1. 按常规方法进行变性(SDS-PAGE)或非变性蛋白电泳。
2. 切取含目的蛋白条带的 PAGE 胶(尽可能地把多余的胶切除,否则会影 响回收效率)。注意:PAGE 胶固定和染色后蛋白回收效果很差,所以建 议把样品分多孔上样,电泳后只切其中一个样孔的胶条进行固定和染色, 然后将此胶条放回到在整体胶中原来的位置,通过显色胶条上的蛋白条带 找到在未染色胶上对应区域,并切下此区域的胶进行回收。
3. 将切下的、重量不超过 1 克的胶块转移到 20 mL 塑料注射器中。用塑料 注射器推杆将胶块从端口挤压出去,使之变成细小的碎片,用自备的 15mL 塑料离心管收集这些破碎的凝胶颗粒。(用其他方法捣碎 PAGE 胶 条也可以,包括液氮研磨)。
4. 加入 1 mL 蛋白胶中量纯化溶液 A,4℃摇晃洗脱至少 2-16 小时(过夜)。 此时最好将将要使用的蛋白胶中量纯化溶液 B 放在冰箱预冷。
5. 10,000 g 离心 10 分钟,转移上清到新的 10-15mL 的塑料离心管中,注 意不要吸取碎胶。
6. 加入 5 倍体积的预冷的蛋白胶中量纯化溶液 B,摇晃混匀。
7. -20℃放置至少 10-30 分钟。
8. 室温 12,000 g(注意:一定要检查使用的离心管是否能够耐受此离心力, 如果不能建议将溶液分到 1.5 mL 的塑料离心管中再进行离心处理)离心 5-20 分钟,弃上清。
9. 室温充分晾干,得到的沉淀即为回收的蛋白质。回收的蛋白质可溶解在适
当的缓冲液中,可用于后续实验(2-D 电泳、质谱测序等)。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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