DNA Shuffling试剂盒_价格_上海博尔森生物科技有限公司

产品详情

DNA Shuffling试剂盒

产品及特点 DNA Shuffling 即 DNA 分子的体外同源重组，它是一种分子水平上的定向进化(directed evolution)技术，它以一个或多个基因为起始材料，通过先随机断裂成小片段，再进行互为模板和引物的 PCR（无外加引物），最后再进行常规 PCR（外加引物）等处理，最后得到含有大量 DNA 重组突变的 PCR 产物。其原理示意图如下：

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本产品就是根据上述原理优化改进而成，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板，无需单独准备各成分。

2. 可以用于对长度在 1000bp 的同源片段进行 shuffling。

3. 操作手册经过优化，1-2 天即可完成，节省大量优化时间。

4. 本产品足够 10 次 DNA Shuffling 反应，只适用于科研，不能用于临床。

规格及成分

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限一年。

使用方法

1. 提前开启 37℃和 75℃水浴或金属浴。

2. 待突变基因片段的制备：待突变基因片段可以用多个含同源片段的质粒为模板、用 PCR 法或酶切法制备。制备时需保证含起始同源片段（或此同源片段的一部分）的 DNA 片段总长度要比 DNA shuffling 终产物（第二轮 PCR产物）长 200-400 bp，即第二轮 PCR 的引物位置要在此步模板制备引物内侧 100-200bp，第二轮 PCR 产物的长度在 1000bp 以下。每次 DNAShuffling 实验至少需要 2 μg 起始同源片段（如果含两个以上同源片段，则彼此的比例为 1:1:1），最多可以使用 5 μg 起始同源片段，并且必须通过胶回收的方法回收，以便彻底去除残留的质粒模板、引物和非特异扩增产物等（如果不去除此步的引物，其将对后续 PCR 造成严重干扰）。最后需用分光光度法准确定量，此溶液即为同源片段，放冰上待用。

3. 准备 DNase I 工作液，将 1 μL 本试剂盒提供的 DNase I 溶液、8uL 超纯水、1 μL DNA Shuffling 试剂盒溶液 A 混合得 DNase 工作液，放冰上待用。DNase 工作液必须现配现用。

4. 设置同源片段碎片化反应：在一个 PCR 管中，按顺序加入下列成分：

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5. 充分轻柔吹打混匀后 37℃水浴 8 分钟，然后立即放 75℃水浴处理 10 分钟以灭活 DNase I。

6. 在 2-3%琼脂糖凝胶上电泳，用常规的胶回收法回收 25-150 bp 范围的所有片段，分光光度法精确测定回收片段的浓度。此即为回收片段，放冰上待用。注意：一定要加合适的 DNA marker 以便确定片段范围。

7. 回收片段重组反应：在一干净 PCR 管中加入 0.5 μg 回收片段、50 μL PCRMix 3.0、补加超纯水到 100 μL。反应总体积为 100 μL

8. 按下面的 PCR 反应参数进行第一轮无引物 PCR：

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9. 取 5-10 μL 进行电泳检测（本 PCR Mix 含上样成分，可以直接上样。红色示踪剂的泳动速度相当于 50bp DNA），然后对预期长度区域的 PCR 产物进行回收（如果 Shuffling 的同源区域长度为 800bp，则回收 600-1000bp范围的片段），得到第一轮 PCR 回收产物。

10. 留部分第一轮 PCR 回收产物之后，用超纯水将其分别稀释 10 倍、20 倍和50 倍，放冰上待用。

11. 取第一轮 PCR 回收产物原液、10 倍稀释液、20 倍稀释液和 50 倍稀释液各 1uL 作为 PCR 模板，按下表设置 4 管第二轮 PCR 反应（100μL 体系）。

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12. 按下列 PCR 参数进行 PCR：

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13. 电泳检测 4 个 PCR 产物，回收预期大小的 PCR 产物（根据引物位置估计预期大小），用于后续克隆和分析实验（略）。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

DNA Shuffling试剂盒信息由上海博尔森生物科技有限公司为您提供，如您想了解更多关于DNA Shuffling试剂盒报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。除供应DNA Shuffling试剂盒外，上海博尔森生物科技有限公司还可为您提供一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装（中pH）、蛋白磷酸酶抑制剂混合液Ⅰ型，100X等产品，公司有专业的客户服务团队，是您值得信赖的合作伙伴。

供货周期：	一周
品牌：	博尔森
规格：	10次
货号：	BES232231ME
CAS号：