供货周期: | 一周 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 50次 |
货号: | BES211039MD |
CAS号: |
柱式血液DNA提取试剂盒(柱式血液DNAout)
产品及特点
本试剂盒适用于各种新鲜及抗凝剂(柠檬酸钠、EDTA 等)处理过的全血基因组 DNA 提取。无需去除红细胞,直接裂解血细胞,DNA 特异吸附到硅胶膜上,通过简单漂洗去除杂质,可快速纯化得到基因组 DNA。使用本试剂盒得到的血液基因组 DNA 无蛋白、核酸酶污染,可直接进行 PCR、酶切和杂交等分子生物学实验。它具有下列特点:
1. 适用范围广:可从抗凝血、白膜层和禽类血等样品中直接提取 DNA;
2. 操作简便:无需有机试剂沉淀,可快速获得高纯度的血液基因组 DNA;
3. 纯度高:去除污染物和抑制剂彻底,便于下游应用。
规格及成分
运输及保存 蛋白酶 K 于-20℃,其他组分室温(15 ~ 25℃),可保存 12 个月。
自备试剂
无水乙醇、RNase A(可选)。
(注意:使用前请先在缓冲液 Buffer W1 和 Buffer W2 中加入无水乙醇)
使用方法
1. 在 1.5 ml 灭菌离心管中加入 20 μl Proteinase K,200 μl 哺乳动物鲜血
或抗凝血。
(注意:如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量 5-15 μl,可加缓冲液 PBS 或生理盐水补足 200 μl 后进行下面的裂解步骤,如要去除 RNA,可加入 4 μl RNase A(100 mg/ml),混匀,静置 5 min)
2. 加入 200 μl Buffer GL,涡旋混匀 15 sec,56℃水浴 10 min。
(注意:期间每隔一段时间震荡离心管,至溶液变得清亮)
3. 加入 200 μl 无水乙醇,充分震荡,短暂离心以去除管盖内壁液体。
4. 将吸附柱放入收集管,将上一步所得溶液全部加入吸附柱中,12,000 rpm 离心 1 min,弃收集管中滤液。
5. 向吸附柱内加入 500 μl Buffer W1,室温 12,000 rpm 离心 30 sec,弃收集管中滤液。
(注意:按要求在 Buffer W1 中加入无水乙醇,用后及时盖紧,以防乙醇挥发)
6. 向吸附柱内加入 600 μl Buffer W2,室温 12,000 rpm 离心 30 sec,弃收集管中滤液。
(注意:Buffer W2 是浓缩液,按要求加入无水乙醇,用后及时盖紧,以防乙醇挥发)
7. 向吸附柱内加入 500 μl Buffer W2,室温 12,000 rpm 离心 30 sec,弃收集管中滤液。
8. 干燥。将离心吸附柱于 12,000 rpm 离心 2 min,甩干残留漂洗液。
(注意:此步不能省略,否则残留乙醇会影响基因组 DNA 的后续使用)
9. 将离心吸附柱置于一个新的 1.5 ml 塑料离心管(自备)中,加入 50 ~ 100μl Buffer EB,室温放置 2 min,12,000 rpm 离心 1 min,离心管底溶液即基因组 DNA。
(注意:为增加洗脱效率,可将洗脱液 Buffer EB 在 60℃预热。如需使用去离子水洗脱,可用 NaOH 调整其 pH 值在 7.0 - 8.5 之间,为了增加回收率,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置 2 min,再次离心收集)
注意事项
如 Buffer GL,Buffer W1 产生沉淀,可在 56℃水浴溶解;
样品应避免反复冻融,否则会导致提取的 DNA 片段小,提取量下降;
所有离心步骤均为台式离心机,室温下操作;
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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