Western及IP细胞裂解液(非变性)

参考价:¥170
供货周期: 现货
品牌: 博尔森
规格: 30ml
货号: BES20013C
CAS号:
上海博尔森生物科技有限公司
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产品详情

Western 及 IP 细胞裂解液

WIP

产品规格: 30ml,60ml,100ml

保存条件:-20ºC 保存,一年有效。

产品描述: 

WIP 组织细胞裂解液(Tissue and Cell lysis solution for Western Blot and Immunoprecipitation ),是一 种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本产品裂解细胞获得的裂解产物,可用于 PAGE,蛋白印迹(Western Blot),免疫沉淀(immnolprecipitation,IP),免疫共沉淀(co-IP) 和蛋白与多肽的分离纯化。 

WIP 裂解液的主要成分为 Tris(pH 7.5,20mM),150mM NaCl,去垢剂 Triton X-100 以及多种蛋白酶 抑制剂,无需自备 PMSF 等蛋白酶抑制剂。WIP 不仅可以用于细胞培养物的裂解,也可直接用于大多数动物 组织的裂解。在有效地裂解组织和细胞的同时,可强烈地抑制蛋白、多肽的降解,并保持原有的分子结构 和蛋白间相互作用。 

用WIP裂解得到的组织细胞蛋白样品,可以用博奥森生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。 由于含有较高浓度的 Triton X-100 等干扰物质,不能用 Bradford 试剂盒测定由本裂解液裂解得到样品的蛋 白浓度。

产品组成:

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使用说明:

1. 培养细胞

(1)取出 WIP 裂解液,待融化后,颠倒混匀数次,适量分装冻存。在使用前取出,按比例加入 PMSF(使其最终浓度为 1mM),混匀,立即使用。

(2)贴壁细胞,去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗 2-3 遍 (如血清中的蛋白没有干扰,也可以不洗)。按 6 孔板每孔加入 100-200 微升的比例加入 WIP。用枪吹打数下,使 WIP 和细胞充分接触。通常 WIP 接触细胞数秒后细胞就会被裂解。

(3)悬浮细胞,收集培养细胞,离心去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗 2-3 遍(如血清中的蛋白没有干扰,也可以不洗),用手指把细胞用力弹散,按 6 孔板每孔细胞加入 100-200 微升的比例加入 WIP。如果细胞数量较大,应按 50-100 万细胞/管分装或根据细胞数量按比例增加 WIP。用手指轻弹管底以促进 WIP 和细胞充分接触,裂解完全时应无明显的细胞颗粒。

(4)裂解物经 10,000-14,000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(5)裂解液用量说明:通常 6 孔板每孔细胞加入 100 微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 150 微升或 200 微升。

2. 组织样品

取 Ep 管,分别称重标记,把组织剪切成小块装入 Ep 管中,称重。按每 20 毫克组织加 100-200 微升的比例加入 WIP(如裂解不完全,可以适当增加 WIP 的用量;如需要的蛋白样品浓度较高,可以适当 减少 WIP 的用量)。用手握式电动组织细胞匀浆器匀浆约 1 分钟或直至充分裂解。10,000-14,000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 

如果组织样品本身非常细小,如淋巴细胞,可直接加入 WIP 裂解,通过振荡(Vortex)以使样品裂解 完全。

注意事项:

1. 为获得最佳的实验效果,可适当分装使用,以尽量避免反复冻融。

2. PMSF 不稳定,应现用现加。

3. 裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。

4. 蛋白酶抑制剂均有较高的毒性,为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。一旦直接接触,请立即用流水冲洗,再向医疗保健结构咨询。

特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!

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Western及IP细胞裂解液(非变性)信息由上海博尔森生物科技有限公司为您提供,如您想了解更多关于Western及IP细胞裂解液(非变性)报价、型号、参数等信息, 欢迎来电或留言咨询。除供应Western及IP细胞裂解液(非变性)外,上海博尔森生物科技有限公司还可为您提供人组蛋白H3(核内参)单克隆即用型免疫组化试剂盒、人GLP-1单克隆即用型免疫组化试剂盒等产品, 公司有专业的客户服务团队,是您值得信赖的合作伙伴。

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