供货周期: | 现货 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 100ml |
货号: | BES25026C |
CAS号: |
NP-40 裂解液
NP-40 Lysis buffer
规格:
100ml储存条件: -20℃避光保存,有效期 12 个月。
简介: NP-40 裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是一种比较温和的细胞组织裂解液。NP-40 裂解液裂 解得到的蛋白样品可以用于常规的 Western、IP 和 co-IP 等。 NP-40 裂解液主要由 NP-40、氯化钠、Tris 组成,NP-40 为最常用的去污剂之一。用本 裂解液得到的蛋白样品,可以用 BCA Protein Assay Kit 测定蛋白浓度。由于含 有较高浓度的去垢剂,不能用 Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。本产 品含有一支 1.5ml PMSF。
本产品仅用于科研领域,不用于临床诊断。
使用方法:
(一) 贴壁培养细胞
1. 取 NP-40 Lysis Buffer 置于室温溶解混匀,加入 PMSF 使终浓度为 1mM。
2. 去除贴壁细胞的培养液,低速离心,弃上清。
3. 按照 6 孔板每孔加入 150~250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例,加入 NP-40 Lysis Buffer 。移液器轻轻吹打,使裂解液和细胞充分接触。置冰上或4℃裂解15~30min。
4. 4℃离心(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
5. 进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(二) 悬浮培养细胞
1. 取 NP-40 Lysis Buffer 置于室温溶解混匀,加入 PMSF 使终浓度为 1mM。低速离心悬浮细胞,弃上清,收集沉淀。
2. 用手指轻弹细胞,使其松散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150~200μl 含有 PMSF 的裂解液的比例,加入 NP-40 Lysis Buffer 。
3. 4℃离心 5~10min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
4. 进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(三) 组织样本
1. 取 NP-40 Lysis Buffer 置于室温溶解混匀,加入 PMSF 使终浓度为 1mM。把组织剪切成细小的碎片,越小越好。
2. 取在液氮或超低温冰箱中冷冻 30min 以上的组织,迅速用液氮研磨,研磨过程尽量控制在 4℃之内,以减少蛋白的降解。
3. 按照每 20mg 组织加入 150~250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的裂解液。冰上4℃裂解。
4. 4℃离心(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
5. 进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
注意事项:
1. 在贴壁培养细胞的操作步骤中,去除贴壁细胞的培养液后,如果血清中的蛋白没有干扰,可以不用清洗。
2. 如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。
3. 在培养细胞的裂解中,如果细胞量较多,必需分装成 50~100 万细胞/离心管,然后再裂解。
4. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈震荡使样品裂解充分。
5. 溶解 NP-40 Lysis Buffer 时,应尽量缩短溶解时间,避免裂解液中的有效成分失效。
6. 细胞裂解的操作步骤,应置于冰上或 4℃进行。
7. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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