供货周期: | 现货 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 100ml |
货号: | BES25027C |
CAS号: |
RIPA 裂解液(弱)
Weak RIPA Lysis Buffer
规格:
100ml储存条件:
RIPA 裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液,裂解得到的蛋白样品可用于常规的 Western、IP 等。蛋白样品可用 BCA Protein Assay Kit 测定蛋白浓度。由于 含有较高浓度的去污剂,不能用 Bradford 法测定 RIPA 裂解后的蛋白浓度。RIPA 裂解液有 多种,根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。可参考说明书中“各种裂解液主 要特点、差异和选择”选择合适的 RIPA 裂解液或其它裂解液。
本产品为 RIPA 裂解液(弱)。含有 PMSF(100mM, 100×)一支。
本产品仅用于科研领域,不用于临床诊断。
使用方法:
(一) 贴壁培养细胞
1. 取 Weak RIPA Lysis Buffer 置于室温溶解混匀后,加入 PMSF 使终浓度为 1mM。
2. 去除贴壁细胞的培养液,低速离心,弃上清。
3. 按照 6 孔板每孔加入 150~250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例, 加入 Weak RIPA Lysis Buffer。移液器轻轻吹打,使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或 4℃裂解,通常裂解液作用于细胞 1~3s 内,细胞就会被裂解。
4. 4℃离心(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
5. 进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(二) 悬浮培养细胞
1. 取 Weak RIPA Lysis Buffer 置室温溶解混匀后,使 PMSF 终浓度为 1mM。
2. 低速离心悬浮细胞,弃上清,收集沉淀。
3. 用手指轻弹细胞,使其松散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150~250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例,加入 Weak RIPA Lysis Buffer。
4. 4℃离心(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
5. 进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(三) 组织样本
1. 取 Weak RIPA Lysis Buffer 置于室温溶解混匀后,加入 PMSF 使终浓度为 1mM。
2. 取在液氮或超低温冰箱中冷冻以上的组织,迅速用液氮研磨,研磨过程尽量控制在
1~2min 之内,以减少蛋白的降解。
3. 按照每 20mg 组织加入 150~250μl 裂解液的比例,加入含有 PMSF 的裂解液。冰上或 4℃裂解 15~30min。
4. 4℃离心(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
5. 进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
注意事项:
1. 在贴壁培养细胞的操作步骤中,去除贴壁细胞的培养液后,如果血清中的蛋白没有干扰,可以不用清洗。
2. 如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。
3. 在培养细胞的裂解中,如果细胞量较多,必需分装成 50~100 万细胞/离心管,然后再裂解。
4. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈震荡使样品裂解充分。
5. 溶解 Lysis Buffer 时,应尽量缩短溶解时间,避免裂解液中的有效成分失效。
6. 细胞裂解的操作步骤,应置于冰上或 4℃进行。
7. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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