供货周期: | 现货 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 200T |
货号: | BES27071C |
CAS号: |
磷酸钙法细胞转染试剂盒
产品规格:200T
保存条件: -20℃保存,有效期12个月。
产品简介:
外源基因导入真核细胞的方法有很多种,如磷酸钙转染法、DEAE-葡聚糖转染法、脂质 体法、电穿孔法、显微注射法等。磷酸钙法细胞转染试剂盒(Calcium Phosphate Cell Transfection Kit)是在传统的磷酸钙细胞转染方法的基础上进行了改良,提高了转染效率,并 降低了毒性,可用于磷酸钙法转染细胞,不仅可以瞬时表达,也可以筛选稳定株。HEK293 是最适合磷酸钙法转染的细胞之一,优化条件后转染效率可以高达 85%以上,一般的转染效 率可达 40~50%左右。其他常见细胞(例如 Hela、CHO 细胞等)也适合磷酸钙法转染,但效率 比 293 细胞要略低一些。 本转染试剂盒主要适合于大多数贴壁细胞的转染,也可于一些悬 浮细胞的转染,一般要求 DNA 浓度在 10~50μg 为宜,Hela、BALB 等细胞沉淀放置 16h, CHO、DUKX、BⅡ等细胞可以通过甘油、DMSO 进行热休克处理以提高转染效率。
本产品仅用于科研,不宜用于临床诊断或其他用途。
组成:
自备材料:
1. 胰蛋白酶消化液
2. 完全培养基
3. PBS
4. 无菌水
操作步骤(仅供参考):
(一)贴壁细胞转染:
1. 在转染前 24h 用胰蛋白酶消化培养细胞,取适量对数期细胞转移至新的培养器皿中,待细胞密度达 70~80% 即可进行转染。后续操作步骤均按 6 孔板计算,如果转染器皿不同,请按比例自行调节用量。
2. 在加入 DNA 之前 2~4h,加入不含抗生素的完全培养液,置于 CO2 培养箱培养,37℃,5% CO2。
3. 取 2~6ug DNA(体积不宜超过 20μl)加入 100ul Calcium chloride solution 混匀即为DNA-CaCl2 溶液。
4. 取 BBS solution 100μl,用移液器一边吹打 BBS solution,一边逐滴加入 DNA-CaCl2溶液(操作缓慢,一般在 1~2min)。
5. 室温静置 20~30min,即为 DNA-CaCl2-BBS 溶液,此时可能出现极其微小颗粒沉淀。
6. 取 DNA-CaCl2-BBS 溶液底部物质均匀加入到 6 孔板细胞中,轻轻晃动混匀。
7. 置于 37℃ 5% CO2 培养箱培养 4~16h。如果培养细胞为 CHO、DUKX 等,可以 DMSO或甘油进行休克处理,转染效率会大大增加,即培养后,用 2ml 含 10%甘油或 20%DMSO的完全培养液替换当前培养液,室温下静置,加 PBS 摇动混匀。
8. 去除培养液,用 PBS 清洗细胞 2 次,加入完全培养液继续培养,一般 24h 后可见转染细胞的表达。
(二)悬浮细胞转染:
1. 低速离心收集悬浮细胞,用 PBS 洗涤 1 次。
2. 取 2~6ug DNA(体积不宜超过 20μl)加入 Calcium chloride solution,混匀,即为 DNACaCl2溶液。
3. 取 BBS solution 100μl,用移液器一边吹打 BBS solution,一边逐滴加入 DNA-CaCl2溶液(操作缓慢,一般在 1~2min)。
4. 室温静置 20~30min,即为 DNA-CaCl2-BBS 溶液,此时可能出现极其微小颗粒沉淀。
5. 每 106 个细胞沉淀用 100ul DNA-CaCl2-BBS 溶液重新悬浮,室温放置 20~30min。
6. 6 孔板每孔加入 2ml 不含抗生素的完全培养基,取 DNA-CaCl2-BBS 溶液底部物质均匀加入到 6 孔板中,轻轻晃动混匀。
7. 置于 37℃ 5% CO2 培养箱培养 4~16h,去除培养液,用 PBS 清洗细胞 2 次,加入 2ml完全培养液继续培养,一般 24h 后可见转染细胞的表达。
注意事项:
1. 注意无菌操作,尽量避免污染,同时 DNA 不应含有蛋白和酚。
2. 休克处理某些细胞系会使转染效率大大提高,但应注意甘油暴露过久易导致细胞死亡。
3. 转染 12~24h 后,可以加入终浓度为 10mmol/L 的丁酸钠溶液,可以提高病毒滴度。
4. BBS solution 的 pH 值直接关系到转染效率,尽量避免长时间暴露在空气中,以免被空气中的二氧化碳酸化。
5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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