供货周期: | 现货 |
品牌: | 博尔森 |
规格: | 50T |
货号: | BES26205C |
CAS号: |
植物基因组DNA提取试剂盒
Plant Genomic DNA Extraction Kit
规格:50T
保存条件:
室温干燥可保存一年,4℃保存可更长时间。
产品简介:
本试剂盒采用高效、专一结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲系统,适合从各种不同的新鲜或冻存植物组织中提取基因组DNA,并可最大限度去除植物组织中的杂质。本试剂盒无需使用酚/氯仿抽提,操作安全。提取的基因组DNA片段大、纯度高、质量稳定可靠,适用于 PCR、荧光定量 PCR、分子标记、文库构建等实验。
产品组份
Buffer LP1: 25 ml (50T)
Buffer LP2: 10 ml (50T)
Buffer LP3 (concentrate): 21 ml (50T)
Buffer GW2 (concentrate): 15 ml (50T)
Buffer GE: 7.5 ml (50T)
RNase A(10mg/ml): 300 μl (50T)
Spin Columns DM with Colletion Tubes 50: (50T)
自备试剂
无水乙醇。
实验准备
1.样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。 2.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer LP3 加27ml无水乙醇和Buffer GW2 加45ml无水乙醇。使用前请检查Buffer LP1和Buffer LP2是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将Buffer LP1和Buffer LP2于56℃水浴重新溶解。
操作步骤
1.取植物新鲜组织100 mg左右或干重组织约20 mg,加入液氮充分研磨。
2.将研磨后的粉末收集到离心管(自备)中,加入400 μl Buffer LP1和6 μl RNase A(10 mg/ml),涡旋振荡1分钟,室温放置10分钟,使其充分裂解。 注意:1)使用涡旋振荡或移液器吹打,充分裂解组织,组织裂解不完全会影响最终的DNA得率。2)请勿在使用前将Buffer LP1与RNase A混合。 3.加入130 μl Buffer LP2,混匀,涡旋震荡1分钟。
4.12,000 rpm(~13,400×g)离心5分钟,将上清移至新的离心管(自备)中。
5.加入1.5倍体积的Buffer LP3(使用前检查是否已加入无水乙醇),充分混匀(如500 μl滤液加入750 μl Buffer LP3)。注意:加入Buffer LP3后应立即混匀,可能会产生沉淀但不影响后续实验。
6.将上步所得溶液和沉淀全部加入到已装入收集管的吸附柱(Spin Columns DM)中,若一次不能加完溶液,可分多次转入。12,000 rpm 离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
7.向吸附柱中加入500 μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。 注意:如吸附膜呈现绿色,向吸附柱中加入500 μl无水乙醇,12,000 rpm 离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
8.重复步骤7。
9.12,000 rpm离心2分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
10.将吸附柱放到一个新离心管(自备)中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50-100 μl Buffer GE或灭菌水,室温放置2-5分钟,12,000 rpm 离心1分钟,收集DNA溶液。-20℃保存DNA。
注意:1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。 3)如果要提高DNA的终浓度,可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上,重复步骤10;若洗脱体积小于100 μl,可以增加DNA的终浓度,但可能会减少DNA的总产量。如果所得DNA的量小于1 μg,推荐用50 μl Buffer GE进行洗脱。
4)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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