供货周期: | 现货 |
品牌: | Gator Bio |
货号: | #350006,350007,350008,350010 |
AAV 中包含的基因组是其表达蛋白或 RNA 的前提,是 AAV 药物发挥药效的核心或基础,若 AAV 中不含基因组,药物不仅没有药效,反而会增加机体针对 AAV 药物的免疫反应。可见基因组滴度是基因治疗产品安全有效的 CQA。 AAV 基因组为线性单链 DNA,大小约 4.7kb,包含增强子、启动子、目的基因和终止子(图1)。理论上这些调控元件和目的基因中的任何一个都可用于确定基因组滴度,但由于存在不完全基因组的部分基因片段,往往仅检测基因组滴度是不够的,还需要检测基因组的完整性(Genome Integrity),即需要所有调控元件(如启动子和目的基因)都存在。 图1. AAV 基因组 目前测定基因组滴度的常用方法有 qPCR、dPCR 和 ddPCR 等,其中 ddPCR 由于无需标准曲线即可对目标分子进行绝对定量而被广泛使用,但该方法存在费力(需要多步稀释)、耗时、检测成本高等缺点,且检测滴度准确度受 PCR 抑制剂和各种样品基质的显著影响。 Gator Bio(小鳄生物)发明了一种全新的 AAV 基因组滴度检测方法:Gator® AAV GeneSwift Kit。该方法结合了 DNA 杂交的特异性以及 BLI 快速简便的优点,可进行 AAV 基因组滴度的准确定量。与 ddPCR 相比,在获得准确定量结果的同时,无需繁琐稀释、大大缩短检测时间,适用于粗样,不受 PCR 抑制剂的影响(图2)。 图2. Gator® AAV GeneSwift Kit 与 ddPCR、dPCR、qPCR 对比 Gator® AAV GeneSwift Kit 特性 定量动态范围宽泛:4E+9 - 3E+12 vg/mL 准确性高(CV%):3% - 9% 检测速度快:35 分钟内可检测 8、16、32 个样品(根据不同型号仪器) 适用于所有 AAV 血清型 适用于粗样检测 兼容各种缓冲液 目的基因特异性,且能够确定基因组完整性 兼容 DNase1、proteinase K、extraneous DNA 和 PCR 抑制剂 GeneSwift Kit 检测性能展示 01 首先将 AAV 衣壳与基因特异性寡核苷酸混合,并在杂交缓冲液中加热裂解;裂解后,将混合物冷却以使荧光素标记和生物素化的寡核苷酸与目的基因(GoI)杂交;然后使用抗荧光素(anti-F)生物传感器结合杂交复合物;最后使用生物素检测溶液检测杂交复合物的生物素分子,通过 Gator® BLI 仪器检测得到其信号值。 图3. Gator® AAV GeneSwift Kit 检测流程 02 图4. A. GeneSwift Kit动态范围和精密度:动态范围为 4E+09 – 3E+12 vg/mL,所有数据点的 % CV 值均 <10%。B. GeneSwift Kit兼容各种缓冲溶液: PBS、工艺缓冲液和粗制裂解液中三个不同浓度的下AAV8 的 BLI 信号。C. GeneSwift Kit与ddPCR检测基因滴度相关性:Expected (dd PCR) vs Calculated titer(GeneSwift Kit)计算滴度值 Gator® 基因治疗 AAV 整体解决方案 小鳄生物(Gator Bio)除了新推出的 GeneSwift Kit 可快速、准确定量 AAV 基因组滴度和完整性之外,还有其他多款探针产品可实现快速、实时在线、高通量的 AAV 衣壳滴度及空壳率检测。 Gator Bio 是目前市场上唯一一家在单一自动化平台上提供 AAV 整体检测方案的厂家。同时 Gator Bio 一直以来秉持坚持创新的理念,不断开发 BLI 新的应用,致力于使用最先进的 BLI 技术以协助生物制药和生命科学领域的科学家们更好、更快、更高效的完成工作。
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