22RV1是来自异种移植(在阉割引起前列腺癌衰退又在其Father的雄性激素信赖型CWR22嫁接后复发的小鼠中连续传代)的人前列腺癌上皮细胞系[1]。此细胞系表达前列腺特异抗原PSA。二羟基睾丸脂酮可轻微刺激细胞生长,经Western Blot检测溶解产物与抗雄性激素受体抗体起免疫反应。EGF可刺激细胞生长,但TGFβ-1不能抑制细胞生长。该细胞在裸鼠中成瘤。近年来,研究表明22RV1产生高滴度的人类逆转录病毒XMRV(异嗜性小鼠白血病病毒相关病毒)。
细胞特性
形态 | 上皮样细胞单层贴壁生长 |
倍增时间 | ~40 hours |
抗原表达 | 前列腺特异性抗原(PSA) |
表达标志物 | 雄激素受体 |
生长培养基 | RPMI-1640+10% FBS+1% P/S |
培养注意事项
1、该细胞有密度依赖,传代比例不宜超过1:4;
2、细胞复苏时需要离心去除DMSO,离心接入皿中,静置两天,保持培养箱环境稳定。冻存细胞复苏最初阶段,贴壁量少,成簇松散贴壁,但是最终细胞会变平,并且扩散成很好的单层,这个过程需要4-5天时间;
3、细胞冻存后复苏成活率不高,推荐冻存液配比为90%血清+10% DMSO;
4、细胞生长缓慢,细胞只能生长到90%的汇合度
传代步骤
1、吸出原培养液;
2、加入2mL左右PBS,轻轻晃动培养瓶润洗细胞,吸出PBS丢弃;
3、加入1mL左右胰酶,轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞;
4、放入培养箱消化,消化2- 3分钟左右,显微镜下看到细胞块中间的细胞明显分离变圆且自然脱落(细胞一定要彻底消化下来,全程不要拍打培养瓶);
5、加入3mL含血清的培养基终止消化,轻轻/反复吹打细胞,在显微镜下观察,细胞尽量呈单颗细胞的悬浮液;;
6、收集细胞悬液离心,1000-1200rpm(250-300g)/min,3-5分钟,离心完吸出上清丢弃;
7、加入新鲜培养基,吹打几下混匀细胞即可,按需接种到新培养瓶,补足足量培养基,拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养;
8、检查培养箱二氧化碳,温度和水盘。
换液步骤
1、吸出旧培养基并沿培养瓶侧边(非培养细胞容器底部)添加新的培养基;
2、每2-3天换液一次;
传代比例和频次
细胞长满80%后,按照1:2的比例传代,2-3天可再次生长到80%;1:3传代,再次长满到80%需要3天以上的时间。
细胞正常生长图片
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