产品详情
大鼠纤维环细胞
一、细胞基本属性 |
细胞名称 | 大鼠纤维环细胞 |
组织来源 | 椎间盘组织 |
商品货号 | ORCR470 |
种属来源 | 大鼠 |
产品规格 | 5×105cells/T25细胞培养瓶 |
细胞简介 | 纤维环 ,位于椎间盘的周缘部 , 由纤维软骨组成 ,纤维环的纤维在椎体间斜行 , 在横切面上排列成同心环状 ,相邻环的纤维具有相反的斜度 ,而相互交叉。纤维 环细胞位于胶原纤维束之前 ,合成和分泌纤维环细胞外基质 ,维持正常的纤维环 结构和功能。 |
培养基 | 原代软骨细胞培养体系 |
换液频率 | 每2-3天换液一次 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞形态 | 多角形细胞 ,不规则细胞 |
传代特性 | 根据细胞特性 |
消化液 | 0.25%胰蛋白酶 |
培养条件 | 气相:空气 ,95%; CO2 , 5% |
质量检测:澳睿赛实验室分离的大鼠纤维环细胞经Ⅱ型胶原(Collagen Ⅱ)或Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ) 免疫荧光染色为阳性 ,纯度可达90%以上 ,且不含有HIV-1、 HBV、 HCV、支原体、细菌、酵母和 真菌等。
大鼠纤维环细胞体外培养周期有限;建议使用澳睿赛配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
二、细胞培养状态
发货时发送细胞电子版照片
三、使用方法
在澳睿赛技术部标准操作流程下 ,建议您收到细胞后尽快进行相关实验。
客户收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中,轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃温浴1-3min;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入5ml完全培养基终止消化;
3)用吸管轻轻吹打混匀,按传代比例接种T25培养瓶传代,然后补充新鲜的完全培养基至5mL,置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
4)待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
3. 悬浮细胞处理
1)收集T25细胞培养瓶中的培养基至50ml离心管中 , 用PBS清洗细胞培养瓶1 - 2次 ,收集清洗 液;
2) 1200 - 1500rpm离心3min , 弃上清 ,收集细胞沉淀;
3)加入5ml 新鲜完全培养基 , 用吸管轻轻吹打混匀 、 分散细胞; 将分散好的细胞调整合适密度接种至培养器皿中 , 置于37°C 、 5 % CO2 、 饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
4)若遇到悬浮细胞团块较大 , 无法机械吹散时 , 向步骤2)中细胞沉淀添加0 . 25%胰蛋白酶消 化液2m L至离心管中 , 用吸 - 管轻轻吹打混匀 ,37°C温浴2 - 3 min , 消化结束后 , 加入胰酶抑 制剂(或血清)终止消化 , 用吸管轻轻吹打 , 分散细胞; 1200rpm离心5min , 弃上清 ,收集细胞沉淀;
5)加入5ml 新鲜完全培养基 , 用吸管轻轻吹打混匀; 按传代比例进行接种传代 ,然后补充 新鲜的完全培养基至5m L , 置于37°C 、 5 % CO2 、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
6)待细胞状态稳定后 ,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
4. 细胞收货脱落
1)收集所有细胞悬液,1000rpm,离心5min,保留沉淀;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中,重悬沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min);消化完向离心管内加入5ml完全培养基终止消化;
3)经1000rpm,离心5min,丢弃上清,用5ml完全培养基(补加1%FBS,促进贴壁)重悬沉淀,接种于新的培养瓶内;
4)待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。
5. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性,贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿(如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等)时,需要对实验器皿进行包被,以增强细胞贴壁性,避免细胞因没贴好影响实验;包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚赖氨酸PLL(0.1mg/ml),明胶(0.1%),依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
四、注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和澳睿赛技术部沟通;由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,详尽告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。
5. 该细胞只可用于科研。
1)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核
2)本产品未通过用于活体诊断的审核
备注:由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同,以上方法仅供各实验室参考
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
大鼠纤维环细胞信息由澳睿赛生物技术(上海)有限公司为您提供,如您想了解更多关于大鼠纤维环细胞报价、型号、参数等信息, 欢迎来电或留言咨询。除供应大鼠纤维环细胞外,澳睿赛生物技术(上海)有限公司还可为您提供人颈动脉内皮细胞、人卵巢间质细胞等产品, 公司有专业的客户服务团队,是您值得信赖的合作伙伴。