病毒DNA/RNA提取试剂盒使用说明书http://www.yajimall.com/
【产品名称】
通用名称:病毒DNA/RNA提取试剂盒
英文名称:Viral DNA/RNA Acid Extraction Kit
【包装规格】 50T/盒
【预期用途】
本产品适合于从血清、血浆、牛奶、体液、培养液、组织匀浆液、拭子等样品中提取病毒RNA或DNA。试剂盒基于硅胶柱纯化技术,提取过程中无需使用有毒的酚氯仿抽提,也无需进行耗时的醇类沉淀。获得的DNA/RNA可直接用于RT-PCR、PCR、Northern杂交、以及各种病毒检测等。
【主要组成成份】
序号 | 组成 | 50T/盒 |
1 | 纯化柱 | 50个 |
2 | 2ml 收集管 | 50个 |
3 | 蛋白酶K | 1.2 ml |
4 | 裂解液(Buffer AL) | 20 ml |
5 | 洗涤液(Buffer RW) | 100 ml |
6 | 洗脱液 | 10 ml |
【储存条件及有效期】
本产品部分组份保存于室温(15-25℃),有效期12个月,长期保存时需置于2-8℃;蛋白酶K保存于2-8℃,长期保存时需置于-20℃,有效期12个月。(收到试剂盒后将蛋白酶K保存于-20℃)
【注意事项】
1、自备无水乙醇(96-100%)、自备离心管;裂解液避免长期与空气接触,易挥发;
2、为避免其他核酸的污染,必须使用不含DNA和RNA的离心管、吸管、枪头、试剂和手套,操作人员须戴口罩;
3、避免反复冻融蛋白酶 K,会影响其活性.
【操作步骤】
1、转移20 µl 蛋白酶K至1.5ml离心管中。
2、转移200 µl样品,如血清、血浆、尿液、培养液上清、或其它无细胞体液至装有蛋白酶K的离心管中,震荡混匀5s。若样品不足200µl,用Buffer PBS或无核酶水补足。(咽/口腔拭子,或固体组织样品先用Buffer PBS浸泡或匀浆后,离心取上清进行操作。)
3、加入250µl 裂解液 至步骤2的混合液中,涡旋混匀15s,室温静置3-5min。
4、加入250µl无水乙醇 至步骤3的混合液中,涡旋混匀15s,室温静置1min。
5、把 纯化柱 装在2ml收集管中,转移步骤4的混合液至纯化柱中。12000rpm离心1min。
6、倒弃滤液把纯化柱装回收集管中,加入650 µl 洗涤液 至纯化柱中,12000rpm离心1min。
7、按照步骤6重复一次。
8、倒弃滤液把纯化柱套回收集管,12000rpm离心空柱2min甩干纯化柱。
9、将纯化柱转移至新的1.5ml离心管,加入50µl 洗脱液至纯化柱的膜中央,室温静置1min,12000rpm离心1min。离心管中即为所提取的样品DNA/RNA。
【常见问题】
1. 纯化柱堵塞
1) 样品用量太多:处理动物抗凝血液时,样品量控制在100-150µl。尽量使用无细胞的样品,如血浆、血清、组织匀浆液的上清等。
2) 蛋白酶 K活性下降:重新制备蛋白酶 K。使用后蛋白酶 K必须保存于-20℃,避免反复冻融。蛋白酶 K与裂解液不能预先混合。
3) 样品含固体颗粒:在第4步加入乙醇前,12000rpm离心3min去除未消化的杂质,转移上清液至新的离心管后再加入乙醇。
4) 样品裂解不充分:样品与裂解液混匀不充分。重新提取,加入裂解液后先颠倒混匀3-5次,然后以最高速度涡旋让样品与裂解液充分混匀。
2. 下游应用结果不理想
1) 样品被反复解冻: 避免反复冻溶样品。推荐使用新鲜样品或只解冻过一次的样品。
2) 蛋白酶K活性下降:更换蛋白酶K。使用后蛋白酶 K必须立即保存于-20℃,避免反复冻融。
3) 洗脱液被污染:更换新的洗脱液或DEPC处理水。
4) 乙醇残留:柱子在洗脱前,需要空甩去除乙醇。对于敏感的应用,柱子在洗脱后,打开柱子的盖子,放置10-15min让乙醇彻底挥发。
5) 洗脱效率:处理富含DNA的样品时,把洗脱液预热至55℃后再进行洗脱,有利于提高DNA得率。
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